| 缩略语表 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 文献回顾 | 第20-33页 |
| 第一部分 假丝酵母尿酸酶聚集特性改造突变体的设计及重组表达 | 第33-55页 |
| 1 材料 | 第34-37页 |
| 1.1 氨基酸序列及分析软件 | 第34-35页 |
| 1.2 实验材料及试剂 | 第35页 |
| 1.3 载体及菌株 | 第35页 |
| 1.4 培养基及缓冲液 | 第35-36页 |
| 1.5 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-44页 |
| 2.1 同源建模 | 第37页 |
| 2.2 建模结果评价 | 第37页 |
| 2.3 基因片段的获取 | 第37-39页 |
| 2.4 构建表达载体 | 第39-40页 |
| 2.5 诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.6 蛋白的分离纯化 | 第41-42页 |
| 2.7 酶活性测定 | 第42-44页 |
| 3 结果 | 第44-53页 |
| 3.1 三维结构建模结果 | 第44页 |
| 3.2 三维模型质量评价结果 | 第44-47页 |
| 3.3 根据三维模型确定突变方式 | 第47-49页 |
| 3.4 表达载体构建及鉴定结果 | 第49-50页 |
| 3.5 离子交换色谱纯化结果 | 第50-51页 |
| 3.6 凝胶过滤纯化结果 | 第51-52页 |
| 3.7 目的蛋白电泳纯度测定 | 第52页 |
| 3.8 酶活性鉴定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第二部分 假丝酵母野生型尿酸酶及聚集特性改造突变体的结构鉴定及改造效果评价 | 第55-81页 |
| 1 材料 | 第55-57页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第55-56页 |
| 1.2 溶液配制 | 第56-57页 |
| 1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-63页 |
| 2.1 质谱分子量测定 | 第57-58页 |
| 2.2 氨基酸序列确证 | 第58-59页 |
| 2.3 聚集特性分析 | 第59页 |
| 2.4 高聚体中的二硫键检测 | 第59-60页 |
| 2.5 高聚体的电泳分析 | 第60页 |
| 2.6 圆二色谱分析 | 第60-61页 |
| 2.7 热稳定测定 | 第61页 |
| 2.8 酶促动力学评价 | 第61-62页 |
| 2.9 37℃条件下酶活性比较 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-77页 |
| 3.1 质谱分子量测定结果 | 第63-64页 |
| 3.2 氨基酸序列确证结果 | 第64-68页 |
| 3.3 聚集特性分析结果 | 第68-70页 |
| 3.4 二硫键鉴定结果 | 第70页 |
| 3.5 高聚体的电泳分析结果 | 第70-71页 |
| 3.6 圆二色谱测定结果 | 第71-72页 |
| 3.7 热稳定性测定 | 第72-75页 |
| 3.8 酶促动力学参数测定结果 | 第75-77页 |
| 3.9 酶活性测定结果 | 第77页 |
| 4 讨论 | 第77-81页 |
| 第三部分 去免疫原性假丝酵母尿酸酶的设计、表达及效果评价 | 第81-108页 |
| 1 材料 | 第82-85页 |
| 1.1 分析软件 | 第82页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第82-83页 |
| 1.3 缓冲液配制 | 第83-84页 |
| 1.4 主要仪器 | 第84-85页 |
| 1.5 实验动物 | 第85页 |
| 2 方法 | 第85-88页 |
| 2.1 突变体“ΔL302 & C249S”的免疫原性位点预测 | 第85页 |
| 2.2 假丝酵母尿酸酶与人尿酸酶的同源性比较 | 第85页 |
| 2.3 突变体“ΔL302 & C249S”去免疫原性设计 | 第85-86页 |
| 2.4 基因合成与蛋白的表达纯化 | 第86页 |
| 2.5 氨基酸序列的确证 | 第86页 |
| 2.6 聚集特性及稳定性分析 | 第86页 |
| 2.7 酶活性测定 | 第86页 |
| 2.8 小鼠免疫及采血 | 第86页 |
| 2.9 抗体滴度测定 | 第86-87页 |
| 2.10 抗体结合位点比较 | 第87页 |
| 2.11 抗体对酶活性的影响 | 第87-88页 |
| 3 结果 | 第88-100页 |
| 3.1 免疫原性位点预测 | 第88-89页 |
| 3.2 假丝酵母尿酸酶与人尿酸酶的同源性比较 | 第89页 |
| 3.3 去免疫原性设计 | 第89-90页 |
| 3.4 基因合成与蛋白的表达纯化 | 第90-92页 |
| 3.5 氨基酸序列的确证 | 第92-93页 |
| 3.6 聚集特性及稳定性分析 | 第93-95页 |
| 3.7 酶活性测定 | 第95-96页 |
| 3.8 抗体滴度测定 | 第96-98页 |
| 3.9 抗体结合位点比较 | 第98-99页 |
| 3.10 抗体对酶活性的影响 | 第99-100页 |
| 4 讨论 | 第100-108页 |
| 小结 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-116页 |
| 个人简历和研究成果 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
