| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 本文所用主要缩写词 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-39页 |
| 1 大豆疫霉根腐病的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1 大豆疫霉根腐病的发生与危害 | 第15页 |
| 1.2 大豆疫霉菌的形态学及生物学特征 | 第15-16页 |
| 1.2.1 菌丝 | 第15页 |
| 1.2.2 无性生殖 | 第15-16页 |
| 1.2.3 有性生殖 | 第16页 |
| 1.3 大豆疫霉病害循环 | 第16-17页 |
| 1.4 大豆疫霉的危害症状 | 第17页 |
| 1.5 大豆对大豆疫霉抗性分子机制的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 植物激素信号通路在抗疫霉病中的研究 | 第17-18页 |
| 1.5.2 miRNA在大豆抗疫霉病中的功能分析 | 第18页 |
| 1.5.3 大豆次级代谢物质在大豆抗疫霉病中的功能分析 | 第18-19页 |
| 2 MIRNA的作用机制及生物学功能研究进展 | 第19-30页 |
| 2.1 植物miRNA的生物合成 | 第19-24页 |
| 2.1.1 pri-miRNA的转录 | 第19-20页 |
| 2.1.2 pri-miRNA的加工 | 第20-21页 |
| 2.1.3 成熟miRNA的加工及转运 | 第21-24页 |
| 2.1.4 miRNA加载到沉默复合体 | 第24页 |
| 2.2 miRNA的调控方式 | 第24-27页 |
| 2.2.1 miRNA调控靶标基因的剪切 | 第24-25页 |
| 2.2.2 miRNA抑制靶基因的翻译 | 第25-26页 |
| 2.2.3 miRNA调控DNA甲基化 | 第26-27页 |
| 2.3 miRNA参与植物对生物胁迫的响应 | 第27-29页 |
| 2.3.1 miRNA参与植物—细菌互作 | 第27页 |
| 2.3.2 miRNA参与植物—真菌互作 | 第27-28页 |
| 2.3.3 miRNA参与植物—病毒互作 | 第28-29页 |
| 2.3.4 miRNA参与植物—卵菌互作 | 第29页 |
| 2.4 植物miRNA响应非生物胁迫 | 第29-30页 |
| 3 WRKY转录因子在植物中的功能研究 | 第30-38页 |
| 3.1 WRKY转录因子的结构特征和分类 | 第30-32页 |
| 3.2 WRKY转录因子的生物学功能 | 第32-34页 |
| 3.2.1 WRKY转录因子参与植物响应生物胁迫 | 第32-33页 |
| 3.2.2 WRKY转录因子在非生物胁迫中的功能 | 第33-34页 |
| 3.3 WRKY转录因子响应胁迫的调控网络 | 第34-38页 |
| 3.3.1 WRKY转录因子之间的调控 | 第35页 |
| 3.3.2 WRKY转录因子参与MAPK信号级联途径 | 第35-37页 |
| 3.3.3 WRKY转录因子参与植物激素信号转导途径 | 第37-38页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 gma-miR1510在大豆抗疫霉根腐病中的功能研究 | 第39-67页 |
| 1 材料与方法 | 第40-54页 |
| 1.1 试验材料 | 第40页 |
| 1.1.1 供试大豆材料 | 第40页 |
| 1.1.2 供试菌株与载体 | 第40页 |
| 1.2 实验方法 | 第40-54页 |
| 1.2.1 大豆疫霉菌株P6497的培养 | 第40-41页 |
| 1.2.2 材料处理与样品采集 | 第41页 |
| 1.2.3 大豆miR1510的表达分析 | 第41-44页 |
| 1.2.4 gma-miR1510的靶基因预测 | 第44页 |
| 1.2.5 gma-miR1510的预测靶基因裂解位点的验证 | 第44-49页 |
| 1.2.6 启动子顺式作用元件分析 | 第49页 |
| 1.2.7 gma-miR1510a/b过表达载体的构建 | 第49-52页 |
| 1.2.8 发根农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第52-53页 |
| 1.2.9 GUS组织染色观察 | 第53-54页 |
| 1.2.10 发状根的侵染及侵染水平分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-64页 |
| 2.1 大豆疫霉菌胁迫下gma-miR1510的表达模式及其组织表达分析 | 第54-55页 |
| 2.2 gma-miR1510靶标基因的预测及5'-RACE实验验证 | 第55-56页 |
| 2.2.1 gma-miR1510靶标基因的预测 | 第55-56页 |
| 2.2.2 gma-miR1510靶标基因的验证 | 第56页 |
| 2.3 在大豆与疫霉菌互作中gma-miR1510与Glyma. 16G135500的表达模式 | 第56-57页 |
| 2.4 gma-miR1510和靶基因Glyma.16G135500启动子顺式作用元件分析 | 第57-61页 |
| 2.5 大豆发状根中过表达gma-miR1510a/b | 第61-62页 |
| 2.6 过表达miR1510a/b降低大豆对疫霉菌的抗性 | 第62-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 第三章 大豆WRKY40转录因子响应疫霉根腐病的抗病机制研究 | 第67-101页 |
| 1 材料与方法 | 第68-74页 |
| 1.1 试验材料 | 第68页 |
| 1.2 诱导处理 | 第68-69页 |
| 1.2.1 疫霉菌诱导处理 | 第68-69页 |
| 1.2.2 激素处理 | 第69页 |
| 1.3 总RNA的提取、cDNA的合成及实时荧光定量PCR | 第69页 |
| 1.4 基因沉默载体的构建 | 第69页 |
| 1.5 发根农杆菌介导的大豆子叶遗传转化 | 第69页 |
| 1.6 大豆转基因发状根抗性鉴定 | 第69-70页 |
| 1.7 H_2O_2的检测 | 第70页 |
| 1.8 蛋白亚细胞定位分析 | 第70-71页 |
| 1.9 酵母双杂交实验 | 第71-74页 |
| 1.9.1 载体构建 | 第71页 |
| 1.9.2 酵母感受态细胞制备 | 第71页 |
| 1.9.3 酵母转化 | 第71-72页 |
| 1.9.4 转录自激活分析 | 第72页 |
| 1.9.5 筛选拟南芥酵母cDNA文库 | 第72-73页 |
| 1.9.6 酵母质粒提取 | 第73页 |
| 1.9.7 酵母双杂交 | 第73-74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-99页 |
| 2.1 GmWRKY40的序列比对分析 | 第74-75页 |
| 2.2 GmWRKY40蛋白的亚细胞定位 | 第75-76页 |
| 2.3 GmWRKY40表达模式分析 | 第76-78页 |
| 2.3.1 GmWRKY40的组织表达分析 | 第76-77页 |
| 2.3.2 大豆疫霉胁迫下GmWRKY40的表达模式 | 第77页 |
| 2.3.3 GmWRKY40受SA、MeJA、ABA和ETH诱导的表达分析 | 第77-78页 |
| 2.4 RNAi-Gm WRKY40发状根的获得 | 第78-80页 |
| 2.5 GmWRKY40参与大豆的基础抗性 | 第80-81页 |
| 2.6 沉默GmWRKY40减弱大豆对疫霉菌的小种专化型抗性 | 第81-87页 |
| 2.6.1 RNAi-GmWRKY40发状根对P6497感病 | 第81-84页 |
| 2.6.2 GmWRKY40参与疫霉侵染过程中H_2O_2的积累 | 第84-86页 |
| 2.6.3 GmWRKY40调控SA、JA信号通路相关基因的表达 | 第86-87页 |
| 2.7 GmWRKY40的互作蛋白研究 | 第87-99页 |
| 2.7.1 pGBKT7-GmWRKY40的载体构建 | 第87-88页 |
| 2.7.2 诱饵载体pGBKT7-GmWRKY40的自激活鉴定 | 第88-89页 |
| 2.7.3 以pBD-WRKY40为诱饵筛选拟南芥cDNA文库及筛选阳性克隆 | 第89-91页 |
| 2.7.4 GmWRKY40候选互作蛋白的基因信息分析 | 第91-92页 |
| 2.7.5 pBD-WRKY40与重组prey质粒的回转验证 | 第92-93页 |
| 2.7.6 pBD-WRKY40与大豆蛋白的互作鉴定 | 第93-96页 |
| 2.7.7 GmWRKY40与JAZ家族蛋白互作 | 第96-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 全文总结 | 第101-103页 |
| 本研究创新之处 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-123页 |
| 附录 | 第123-127页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
