| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-30页 |
| 1 寄主核盘菌 | 第17-19页 |
| 1.1 致病力及危害 | 第17页 |
| 1.2 菌核病的防治 | 第17-19页 |
| 2 用作生防菌的盾壳霉 | 第19-24页 |
| 2.1 分子生物学研究 | 第19-22页 |
| 2.2 防病机理 | 第22-24页 |
| 2.2.1 盾壳霉的重寄生作用 | 第22-23页 |
| 2.2.2 盾壳霉的抗生作用 | 第23-24页 |
| 3 真菌铁载体-铁转运子(SITS) | 第24-26页 |
| 4 代谢组学及其质谱分析技术 | 第26-29页 |
| 4.1 代谢组学简介 | 第26-27页 |
| 4.2 代谢组学质谱分析技术 | 第27-29页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 盾壳霉T-DNA插入体库的构建及突变体筛选 | 第30-41页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| 1.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 1.1.1 菌株及培养方法 | 第30-31页 |
| 1.1.2 质粒与载体 | 第31页 |
| 1.1.3 试剂和仪器 | 第31页 |
| 1.2 试验方法 | 第31-35页 |
| 1.2.1 农杆菌介导的盾壳霉孢子转化方法 | 第31-32页 |
| 1.2.2 盾壳霉总基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 1.2.3 转化子的PCR鉴定和测序分析 | 第33页 |
| 1.2.4 转化子T-DNA插入Souhthern杂交分析 | 第33-34页 |
| 1.2.5 利用Inverse PCR扩增T-DNA侧翼序列 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.1 表型异常的突变体及其生物学特性 | 第35-38页 |
| 2.2 转化子中T-DNA标记插入位点数Southern杂交分析 | 第38-39页 |
| 2.3 T-DNA侧翼基因组序列分析 | 第39页 |
| 3 结论与讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 CmSIT1基因克隆及功能验证 | 第41-68页 |
| 1 材料与方法 | 第41-48页 |
| 1.1 材料 | 第41-42页 |
| 1.1.1 菌株的保存及培养 | 第41-42页 |
| 1.1.2 质粒及载体 | 第42页 |
| 1.1.3 试剂和仪器 | 第42页 |
| 1.2 方法 | 第42-48页 |
| 1.2.1 盾壳霉菌株生长速度的测定 | 第42页 |
| 1.2.2 突变体菌株寄生致腐核盘菌菌核能力测定 | 第42-43页 |
| 1.2.3 菌丝显微形态观察 | 第43页 |
| 1.2.4 拮抗真菌特性测定 | 第43页 |
| 1.2.5 ZS-1TN1812菌株抗生物质的初步特性鉴定 | 第43-44页 |
| 1.2.6 菌株ZS-1TN1812发酵液对菌核病的防治 | 第44-45页 |
| 1.2.7 CmSIT1的功能预测 | 第45页 |
| 1.2.8 CmSIT1基因的表达动态分析 | 第45-46页 |
| 1.2.9 DNA提取和Southern杂交 | 第46页 |
| 1.2.10 CmSIT1基因超表达载体的构建 | 第46页 |
| 1.2.11 基因转化子的形态特征观察 | 第46-47页 |
| 1.2.12 对铁离子压力的反应 | 第47页 |
| 1.2.13 与寄主和非寄主共同培养时CmSIT1基因的表达模式 | 第47页 |
| 1.2.14 菌丝内铁含量测定 | 第47-48页 |
| 1.2.15 数据分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-64页 |
| 2.1 盾壳霉突变体ZS-1TN1812表型异常 | 第48-50页 |
| 2.2 突变体ZS-1TN1812能够产生大量的抗真菌物质 | 第50-53页 |
| 2.3 突变体ZS-1TN1812中T-DNA的插入激活了CmSIT1的表达 | 第53-55页 |
| 2.4 CmSIT1推定编码铁载体-铁转运子 | 第55-58页 |
| 2.5 CmSIT1的超量表达导致了突变体ZS-1TN1812的异常表型 | 第58-60页 |
| 2.6 适量的铁离子致使ZS-1与ZS-1TN1812表型相似 | 第60-62页 |
| 2.7 CmSIT1在盾壳霉与核盘菌互作早期表达 | 第62-63页 |
| 2.8 突变体ZS-1TN1812菌丝内铁高度积累 | 第63-64页 |
| 3 结论与讨论 | 第64-68页 |
| 第四章 盾壳霉转录组测序及分析 | 第68-89页 |
| 1 材料与方法 | 第68-73页 |
| 1.1 材料 | 第68-69页 |
| 1.1.1 菌株及培养方法 | 第68-69页 |
| 1.1.2 试剂 | 第69页 |
| 1.2 方法 | 第69-73页 |
| 1.2.1 盾壳霉测序菌株的培养和样品制备 | 第69页 |
| 1.2.2 转录表达谱构建 | 第69-70页 |
| 1.2.3 表达谱差异表达基因的筛选 | 第70-71页 |
| 1.2.4 表达谱差异基因的表达验证 | 第71页 |
| 1.2.5 Gene Ontology功能富集分析 | 第71-72页 |
| 1.2.6 Pathway富集分析 | 第72-73页 |
| 1.2.7 转录组表达谱结果中重要通路的分析与验证 | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-87页 |
| 2.1 转录组测序质量评估 | 第73-74页 |
| 2.2 表达谱的差异基因 | 第74-76页 |
| 2.3 差异基因的GO分析 | 第76-79页 |
| 2.4 差异基因Pathway分析 | 第79-87页 |
| 3 结论与讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 代谢组物质鉴定 | 第89-105页 |
| 1 材料与方法 | 第89-94页 |
| 1.1 试验材料 | 第89-90页 |
| 1.1.1 菌株及培养方法 | 第89-90页 |
| 1.1.2 仪器和试剂 | 第90页 |
| 1.2 试验方法 | 第90-94页 |
| 1.2.1 盾壳霉样品代谢组学研究流程 | 第90-91页 |
| 1.2.2 GC-MS样品的准备和提取方法 | 第91页 |
| 1.2.3 LC-MS样品的准备和提取方法 | 第91-92页 |
| 1.2.4 数据预处理 | 第92页 |
| 1.2.5 多元统计分析 | 第92-93页 |
| 1.2.6 代谢物质分析 | 第93-94页 |
| 1.2.7 过氧化氢的含量的测定 | 第94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-103页 |
| 2.1 盾壳霉测定样品的多维定标和主成分分析 | 第94-95页 |
| 2.2 鉴定出物质的差异显著性 | 第95-97页 |
| 2.3 盾壳霉测定样品的分析 | 第97-100页 |
| 2.4 代谢节点与转录组数据的相互验证 | 第100-103页 |
| 3 结论与讨论 | 第103-105页 |
| 第六章 结论与展望 | 第105-109页 |
| 6.1 主要结论 | 第105-107页 |
| 6.2 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-143页 |
| 附录 Ⅰ | 第143-146页 |
| 附录 Ⅱ 已发表的文章 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-150页 |
