菊花RNAi载体构建与青蒿遗传再生体系的建立
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTACT | 第6-7页 |
| 缩写词(Abbreviations) | 第8-12页 |
| 1 绪论 | 第12-17页 |
| 1.1 菊花育种 | 第12-13页 |
| 1.2 DNA甲基化 | 第13-14页 |
| 1.3 RNAi干扰技术 | 第14-16页 |
| 1.3.1 RNAi作用机制 | 第14页 |
| 1.3.2 RNAi特点 | 第14-15页 |
| 1.3.3 RNAi技术在植物中的研究和应用 | 第15-16页 |
| 1.4 本研究的目的、意义和研究内容 | 第16-17页 |
| 2 菊花RNAi载体的构建 | 第17-34页 |
| 2.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 质粒载体与菌株 | 第17页 |
| 2.2 实验药品、试剂及试剂的配制 | 第17-18页 |
| 2.2.1 实验药品、试剂 | 第17页 |
| 2.2.2 试剂配制 | 第17-18页 |
| 2.3 实验仪器 | 第18页 |
| 2.4 培养基配制 | 第18-19页 |
| 2.4.1 LB培养基 | 第18-19页 |
| 2.4.2 YEB培养基 | 第19页 |
| 2.5 引物序列 | 第19页 |
| 2.6 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.6.1 菊花RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.6.2 菊花cDNA第一链的合成 | 第20-21页 |
| 2.6.3 差异序列的克隆 | 第21页 |
| 2.6.4 DNA目的产物的回收 | 第21-22页 |
| 2.6.5 DNA目的片段与T载体连接 | 第22页 |
| 2.6.6 热击法转化大肠杆菌 | 第22页 |
| 2.6.7 质粒提取 | 第22-23页 |
| 2.6.8 双酶切 | 第23-24页 |
| 2.6.9 酶切产物与载体连接 | 第24-25页 |
| 2.6.10 重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| 2.6.11 测序 | 第25页 |
| 2.6.12 农杆菌感受态制备和转化 | 第25-26页 |
| 2.7 结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.7.1 菊花差异片段的克隆 | 第26-27页 |
| 2.7.2 序列比对结果分析 | 第27-28页 |
| 2.7.3 双酶切结果分析 | 第28-29页 |
| 2.7.4 KX-RNAi载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.7.5 菊花紫精灵RNAi载体构建成功 | 第30-31页 |
| 2.7.6 菊花紫精灵RNAi载体转化农杆菌 | 第31-32页 |
| 2.8 小结与讨论 | 第32-34页 |
| 2.8.1 RNAi载体构建方法的选择 | 第32页 |
| 2.8.2 RNAi载体靶基因选择 | 第32-33页 |
| 2.8.3 RNAi载体引物的设计 | 第33页 |
| 2.8.4 RNAi载体构建的实验操作的常见问题 | 第33-34页 |
| 3 青蒿遗传再生体系的建立 | 第34-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 实验药品、试剂及其溶液配制 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 青蒿外植体叶片、叶柄的消毒 | 第35-36页 |
| 3.2.2 青蒿叶片与叶柄愈伤诱导 | 第36页 |
| 3.2.3 青蒿愈伤分化 | 第36-37页 |
| 3.2.4 青蒿生根培养和移栽 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 青蒿外植体消毒 | 第37-38页 |
| 3.3.2 青蒿愈伤诱导结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.3.3 青蒿愈伤分化结果与分析 | 第41-42页 |
| 3.3.4 生根培养基与移栽 | 第42-43页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 3.4.1 青蒿外植体消毒与灭菌 | 第43页 |
| 3.4.2 青蒿愈伤诱导与分化 | 第43-44页 |
| 3.4.3 分化苗生根 | 第44页 |
| 3.4.4 叶柄的一次成苗体系 | 第44-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
