| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 课题的研究背景与目的意义 | 第11-12页 |
| 1.2 桦褐孔菌多糖研究概况 | 第12-17页 |
| 1.2.1 桦褐孔菌多糖分级纯化 | 第12-15页 |
| 1.2.2 桦褐孔菌多糖药理作用 | 第15-17页 |
| 1.3 桦褐孔菌多糖抗肿瘤作用机制研究现状 | 第17-19页 |
| 1.4 结肠癌概述 | 第19-24页 |
| 1.4.1 结肠癌的病因 | 第19-20页 |
| 1.4.2 结肠癌与细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.4.3 结肠癌与线粒体凋亡途径 | 第21-23页 |
| 1.4.4 结肠癌的预防与治疗 | 第23-24页 |
| 1.4.5 桦褐孔菌对结肠癌作用进展 | 第24页 |
| 1.5 国内外文献综述的简析 | 第24-25页 |
| 1.6 课题主要研究内容 | 第25-26页 |
| 1.7 技术路线 | 第26-27页 |
| 第2章 材料和方法 | 第27-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 细胞来源及培养 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 多糖提取工艺 | 第29-30页 |
| 2.2.2 多糖除色素方法的选择 | 第30-31页 |
| 2.2.3 多糖脱蛋白方法 | 第31-32页 |
| 2.2.4 糖蛋白的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.5 多糖的理化性质 | 第33-34页 |
| 2.2.6 桦褐孔菌多糖的超滤膜分级 | 第34-35页 |
| 2.2.7 单糖组成分析 | 第35页 |
| 2.2.8 细胞活力检测(CCK-8检测) | 第35-36页 |
| 2.2.9 细胞形态观察 | 第36页 |
| 2.2.10 DNA凝胶电泳 | 第36页 |
| 2.2.11 HT-29细胞凋亡与坏死的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.12 流式细胞仪检测细胞周期 | 第37页 |
| 2.2.13 线粒体凋亡膜电位变化 | 第37页 |
| 2.2.14 体外反转录合成及RT-PCR反应 | 第37-38页 |
| 2.2.15 Westernblot印迹法 | 第38-39页 |
| 2.2.16 数据处理及绘图 | 第39-40页 |
| 第3章 桦褐孔菌多糖提取分级、生物活性及理化性质 | 第40-52页 |
| 3.1 多糖得率 | 第40页 |
| 3.2 多糖的理化性质 | 第40-43页 |
| 3.2.1 多糖含量测定 | 第41页 |
| 3.2.2 蛋白质含量测定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 糖醛酸含量测定 | 第42页 |
| 3.2.4 小结 | 第42-43页 |
| 3.3 分级多糖生物活性测定 | 第43-46页 |
| 3.3.1 阳性对照5-Fu对HT-29结肠癌细胞抑制效果 | 第43-44页 |
| 3.3.2 分级多糖抑癌作用结果 | 第44-46页 |
| 3.3.3 小结 | 第46页 |
| 3.4 桦褐孔菌多糖的超滤膜分级 | 第46-51页 |
| 3.4.1 多糖除色素方法的选择 | 第46-47页 |
| 3.4.2 多糖IOP60脱蛋白方法 | 第47页 |
| 3.4.3 糖蛋白的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.4 不同分子量桦褐孔菌多糖的分布情况及其含量测定 | 第48-49页 |
| 3.4.5 不同分子量多糖抑癌活性比较 | 第49-50页 |
| 3.4.6 单糖组成分析 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞凋亡的研究 | 第52-70页 |
| 4.1 细胞形态观察 | 第52-54页 |
| 4.1.1 光学观察 | 第52-53页 |
| 4.1.2 荧光观察 | 第53页 |
| 4.1.3 苏木精-伊红染色 | 第53-54页 |
| 4.2 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞DNA片段化 | 第54-55页 |
| 4.3 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞凋亡 | 第55-57页 |
| 4.4 桦褐孔菌多糖对HT-29细胞周期的影响 | 第57-59页 |
| 4.5 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞线粒体膜电位的损失 | 第59-60页 |
| 4.6 体外反转录合成及RT-PCR反应 | 第60-63页 |
| 4.6.1 引物特异性验证 | 第60页 |
| 4.6.2 HT-29细胞总RNA的提取 | 第60-61页 |
| 4.6.3 桦褐孔菌多糖对HT-29细胞凋亡相关基因转录水平的影响 | 第61-63页 |
| 4.7 WESTERNBLOT分析 | 第63-68页 |
| 4.7.1 桦褐孔菌多糖对Bcl-2蛋白表达的影响 | 第63-64页 |
| 4.7.2 桦褐孔菌多糖对Bax蛋白表达的影响 | 第64-66页 |
| 4.7.3 桦褐孔菌多糖对Caspase-3蛋白表达的影响 | 第66-68页 |
| 4.8 本章小结 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
