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桦褐孔菌多糖的分级纯化及诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第1章 绪论第11-27页
    1.1 课题的研究背景与目的意义第11-12页
    1.2 桦褐孔菌多糖研究概况第12-17页
        1.2.1 桦褐孔菌多糖分级纯化第12-15页
        1.2.2 桦褐孔菌多糖药理作用第15-17页
    1.3 桦褐孔菌多糖抗肿瘤作用机制研究现状第17-19页
    1.4 结肠癌概述第19-24页
        1.4.1 结肠癌的病因第19-20页
        1.4.2 结肠癌与细胞凋亡第20-21页
        1.4.3 结肠癌与线粒体凋亡途径第21-23页
        1.4.4 结肠癌的预防与治疗第23-24页
        1.4.5 桦褐孔菌对结肠癌作用进展第24页
    1.5 国内外文献综述的简析第24-25页
    1.6 课题主要研究内容第25-26页
    1.7 技术路线第26-27页
第2章 材料和方法第27-40页
    2.1 实验材料第27-29页
        2.1.1 实验仪器第27-28页
        2.1.2 材料与试剂第28-29页
        2.1.3 细胞来源及培养第29页
    2.2 实验方法第29-40页
        2.2.1 多糖提取工艺第29-30页
        2.2.2 多糖除色素方法的选择第30-31页
        2.2.3 多糖脱蛋白方法第31-32页
        2.2.4 糖蛋白的鉴定第32-33页
        2.2.5 多糖的理化性质第33-34页
        2.2.6 桦褐孔菌多糖的超滤膜分级第34-35页
        2.2.7 单糖组成分析第35页
        2.2.8 细胞活力检测(CCK-8检测)第35-36页
        2.2.9 细胞形态观察第36页
        2.2.10 DNA凝胶电泳第36页
        2.2.11 HT-29细胞凋亡与坏死的测定第36-37页
        2.2.12 流式细胞仪检测细胞周期第37页
        2.2.13 线粒体凋亡膜电位变化第37页
        2.2.14 体外反转录合成及RT-PCR反应第37-38页
        2.2.15 Westernblot印迹法第38-39页
        2.2.16 数据处理及绘图第39-40页
第3章 桦褐孔菌多糖提取分级、生物活性及理化性质第40-52页
    3.1 多糖得率第40页
    3.2 多糖的理化性质第40-43页
        3.2.1 多糖含量测定第41页
        3.2.2 蛋白质含量测定第41-42页
        3.2.3 糖醛酸含量测定第42页
        3.2.4 小结第42-43页
    3.3 分级多糖生物活性测定第43-46页
        3.3.1 阳性对照5-Fu对HT-29结肠癌细胞抑制效果第43-44页
        3.3.2 分级多糖抑癌作用结果第44-46页
        3.3.3 小结第46页
    3.4 桦褐孔菌多糖的超滤膜分级第46-51页
        3.4.1 多糖除色素方法的选择第46-47页
        3.4.2 多糖IOP60脱蛋白方法第47页
        3.4.3 糖蛋白的鉴定第47-48页
        3.4.4 不同分子量桦褐孔菌多糖的分布情况及其含量测定第48-49页
        3.4.5 不同分子量多糖抑癌活性比较第49-50页
        3.4.6 单糖组成分析第50-51页
    3.5 本章小结第51-52页
第4章 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞凋亡的研究第52-70页
    4.1 细胞形态观察第52-54页
        4.1.1 光学观察第52-53页
        4.1.2 荧光观察第53页
        4.1.3 苏木精-伊红染色第53-54页
    4.2 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞DNA片段化第54-55页
    4.3 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞凋亡第55-57页
    4.4 桦褐孔菌多糖对HT-29细胞周期的影响第57-59页
    4.5 桦褐孔菌多糖诱导HT-29细胞线粒体膜电位的损失第59-60页
    4.6 体外反转录合成及RT-PCR反应第60-63页
        4.6.1 引物特异性验证第60页
        4.6.2 HT-29细胞总RNA的提取第60-61页
        4.6.3 桦褐孔菌多糖对HT-29细胞凋亡相关基因转录水平的影响第61-63页
    4.7 WESTERNBLOT分析第63-68页
        4.7.1 桦褐孔菌多糖对Bcl-2蛋白表达的影响第63-64页
        4.7.2 桦褐孔菌多糖对Bax蛋白表达的影响第64-66页
        4.7.3 桦褐孔菌多糖对Caspase-3蛋白表达的影响第66-68页
    4.8 本章小结第68-70页
结论第70-71页
参考文献第71-82页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第82-84页
致谢第84页

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