| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-27页 |
| 1.1 组蛋白修饰及其生物学功能 | 第9-13页 |
| 1.2 裂殖酵母中组蛋白甲基化修饰的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 组蛋白甲基化修饰的分布与功能 | 第13-14页 |
| 1.2.2 组蛋白甲基化修饰的调控——转移酶与去甲基化酶 | 第14-16页 |
| 1.2.3 组蛋白H3K4甲基转移酶——Set1复合体 | 第16-18页 |
| 1.3 裂殖酵母中组蛋白乙酰化修饰的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 组蛋白乙酰化分布与调控 | 第18-20页 |
| 1.3.2 组蛋白乙酰转移酶——NuA4复合体 | 第20-21页 |
| 1.4 裂殖酵母中必需基因定义与研究现状 | 第21-25页 |
| 1.4.1 必需基因定义及基因互作研究 | 第21-24页 |
| 1.4.2 在裂殖酵母中利用piggyBac转座子遗传筛选对必需基因功能进行探索 | 第24-25页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容及意义 | 第25-27页 |
| 1.5.1 探索裂殖酵母Lid2蛋白复合体必需功能 | 第25页 |
| 1.5.2 探索裂殖酵母Clr6蛋白复合体必需功能 | 第25-27页 |
| 第二章 研究材料与方法 | 第27-45页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第27-31页 |
| 2.1.1 培养基及常用储液 | 第27-28页 |
| 2.1.2 酵母菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第28页 |
| 2.1.4 常用试剂 | 第28-31页 |
| 2.2 实验室常用仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-45页 |
| 2.3.1 载体构建 | 第32-33页 |
| 2.3.2 基因定点突变载体构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 质粒转化大肠杆菌(E.coli)感受态 | 第34页 |
| 2.3.4 菌株PCR | 第34页 |
| 2.3.5 基因转入裂殖酵母 | 第34-35页 |
| 2.3.6 随机孢子分析法 | 第35页 |
| 2.3.7 孢子四分子分析法 | 第35页 |
| 2.3.8 细胞生长检测 | 第35-36页 |
| 2.3.9 碱裂解法提取蛋白 | 第36页 |
| 2.3.10 蛋白免疫印迹技术(Western Blot) | 第36页 |
| 2.3.11 DNA提取 | 第36-37页 |
| 2.3.12 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第37-38页 |
| 2.3.13 高通量测序DNA文库构建 | 第38-39页 |
| 2.3.14 大肠杆菌His标签蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.15 蛋白免疫共沉淀(IP) | 第40页 |
| 2.3.16 亲和纯化质谱样品(GFP标签蛋白)制备 | 第40-41页 |
| 2.3.17 荧光显微镜技术 | 第41页 |
| 2.3.18 Hoechst及Calcofluor染色 | 第41-42页 |
| 2.3.19 PB转座子遗传筛选系统 | 第42页 |
| 2.3.20 MNNG化学诱变技术 | 第42页 |
| 2.3.21 必需基因jmj3缺陷菌株构建 | 第42-43页 |
| 2.3.22 组蛋白H3K4甲基化体外结合检测 | 第43页 |
| 2.3.23 酵母染色体结合蛋白检测 | 第43-44页 |
| 2.3.24 酵母RNA提取 | 第44页 |
| 2.3.25 实时荧光PCR检测 | 第44-45页 |
| 第三章 裂殖酵母中Lid2蛋白复合体必需功能研究 | 第45-73页 |
| 3.1 研究背景 | 第45页 |
| 3.2 实验结果 | 第45-68页 |
| 3.2.1 裂殖酵母的jmj3与lid2是必需基因,编码蛋白组成Lid2蛋白复合体 | 第45-46页 |
| 3.2.2 必需基因jmj3缺失突变致死性可被编码合成Set1C蛋白亚基的基因缺失突变所抑制 | 第46-48页 |
| 3.2.3 jmj3的省却抑制子突变也抑制必需基因lid2缺失致死表型 | 第48页 |
| 3.2.4 Jmj3的必需功能与Set1C催化的H3K4甲基化有关 | 第48-50页 |
| 3.2.5 仅破坏H3K4me3不足以抑制jmj3△致死表型 | 第50-52页 |
| 3.2.6 Jmj3或Lid2的保守催化位点与其必需功能无关,且jmj3△或lid2△致死性并不是整体H3K4me水平变化引起 | 第52-53页 |
| 3.2.7 化学诱变筛选发现破坏Png1蛋白的PHD结构域能抑制jmj3△致死表型 | 第53-55页 |
| 3.2.8 lid2△致死表型也可以被破坏Png1蛋白的PHD结构域所抑制 | 第55页 |
| 3.2.9 Png1蛋白的PHD结构域能结合H3K4me位点 | 第55-57页 |
| 3.2.10 Jmj3抑制Png1招募到染色质上 | 第57页 |
| 3.2.11 Png1的N端对jmj3△set1△与jmj3△png1-△PHD存活是必需的 | 第57-59页 |
| 3.2.12 Png1是NuA4C的重要组成,对NuA4C的组蛋白乙酰转移酶活性有着重要的调节作用 | 第59-60页 |
| 3.2.13 Mst1_PHD嵌合蛋白过表达导致野生型细胞死亡,但是致死表型与jmj3△或lid2△类似 | 第60-61页 |
| 3.2.14 过表达Mst1_PHD的致死表型特异地被set1△或H3K4△/R所抑制 | 第61-63页 |
| 3.2.15 Jmj3抑制Mst1_PHD表达造成的致死性 | 第63-64页 |
| 3.2.16 下调Clr6表达量也可以抑制jmj3△或lid2△的致死表型 | 第64-66页 |
| 3.2.17 三突变体遗传分析发现clr6Pr_In与png1-△PHD抑制jmj3△致死性的分子机制可能不同,但是与Swr1C介导的H2A.Z重排调控相关 | 第66-67页 |
| 3.2.18 裂殖酵母中Lid2C的必需功能调控 | 第67-68页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第68-73页 |
| 3.3.1 Lid2C的必需功能与Set1C催化的组蛋白H3K4me有关 | 第68页 |
| 3.3.2 Jmj3或Lid2的必需功能不是调节H3K4me水平 | 第68-69页 |
| 3.3.3 Jmj3有无组蛋白去甲基化酶活性仍然不清楚 | 第69页 |
| 3.3.4 jmj3△或lid2△使酵母细胞出现SIN表型 | 第69-70页 |
| 3.3.5 Png1利用PHD结构域与H3K4me的结合能力发挥毒性作用而导致jmj3△死亡 | 第70页 |
| 3.3.6 Png1蛋白不同的结构域有着不同的功能 | 第70页 |
| 3.3.7 Jmj3的必需功能是拮抗Png1介导的NuA4C毒性效应 | 第70-71页 |
| 3.3.8 三突变体遗传分析进一步发现了多个基因互作关系,揭示Lid2C必需调控是一个复杂的生物学过程 | 第71-73页 |
| 第四章 裂殖酵母中对Clr6蛋白复合体必需功能的探索 | 第73-81页 |
| 4.1 研究背景 | 第73-74页 |
| 4.2 实验结果 | 第74-79页 |
| 4.2.1 Clr6蛋白复合体中核心酶Clr6必需功能的研究 | 第74-77页 |
| 4.2.2 Clr6蛋白复合体中SIN3三个同源蛋白的功能研究 | 第77-79页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 附表1 实验菌株列表 | 第95-107页 |
| 附表2 实验质粒列表 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 个人简历 | 第111页 |
