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代谢工程改造酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum)强化丁酸生产及木质纤维素利用

摘要第5-8页
Abstract第8-10页
第一章 绪论第16-36页
    1.1 引言第16-17页
    1.2 丁酸的概述第17-18页
        1.2.1 丁酸的性质第17页
        1.2.2 丁酸的用途第17-18页
        1.2.3 丁酸的生产第18页
    1.3 微生物发酵法产丁酸研究现状第18-26页
        1.3.1 丁酸发酵菌种第18-20页
        1.3.2 丁酸代谢合成途径第20-22页
        1.3.3 丁酸发酵存在的问题第22-23页
        1.3.4 丁酸发酵的发展策略第23-26页
    1.4 农作物秸秆资源转化利用第26-32页
        1.4.1 农作物秸秆酸水解第27-28页
        1.4.2 农作物秸秆酶水解第28-30页
        1.4.3 增强水解产物利用的策略第30-32页
    1.5 热激蛋白第32-34页
        1.5.1 热激蛋白简介第32-33页
        1.5.2 热激蛋白分类第33页
        1.5.3 ClassI型热激蛋白第33-34页
    1.6 本课题的目的意义和研究内容第34-36页
        1.6.1 目的意义第34页
        1.6.2 研究内容第34-36页
第二章 C.tyrobutyricum中过表达6-磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶对丁酸产量的影响第36-62页
    2.1 引言第36-37页
    2.2 实验材料与方法第37-48页
        2.2.1 菌株和质粒第37-38页
        2.2.2 本章所用引物第38页
        2.2.3 试剂与仪器第38-40页
        2.2.4 培养基和溶液配方第40-41页
        2.2.5 实验方法第41-46页
        2.2.6 分析测定方法第46-48页
    2.3 结果与讨论第48-60页
        2.3.1 重组质粒的构建、鉴定与转化第48-49页
        2.3.2 重组菌株SDS-PAGE检测第49-50页
        2.3.3 C.tyrobutyricum补料分批发酵动力学第50-54页
        2.3.4 重组菌株丁酸耐受性的变化第54-55页
        2.3.5 重组菌株葡萄糖耐受性的变化第55-56页
        2.3.6 C.tyrobutyricum高糖浓度下分批发酵第56-60页
    2.4 本章小结第60-62页
第三章 强化乙酰CoA到丁酸合成代谢流提高C.tyrobutyricum丁酸选择性第62-80页
    3.1 引言第62-63页
    3.2 实验材料与方法第63-66页
        3.2.1 菌株和质粒第63-64页
        3.2.2 本章所用引物第64页
        3.2.3 试剂与仪器第64页
        3.2.4 培养基和溶液配方第64-65页
        3.2.5 实验方法第65-66页
        3.2.6 分析测定方法第66页
    3.3 结果与讨论第66-78页
        3.3.1 重组质粒的构建、鉴定与转化第66-68页
        3.3.2 重组菌株SDS-PAGE检测第68-69页
        3.3.3 C.tyrobutyricum补料分批发酵动力学第69-71页
        3.3.4 C.tyrobutyricum中共表达cat1、crt和thl进一步降低乙酸产量第71-73页
        3.3.5 C.tyrobutyricumATCC25755/ppcc补料分批发酵动力学第73-74页
        3.3.6 C.tyrobutyricum在高糖浓度下分批发酵第74-78页
    3.4 本章小结第78-80页
第四章 C.tyrobutyricum中过表达ClassI型热激蛋白对丁酸产量和丁酸耐受性的影响第80-101页
    4.1 引言第80-81页
    4.2 实验材料与方法第81-89页
        4.2.1 菌株和质粒第81页
        4.2.2 本章所用引物第81-83页
        4.2.3 试剂与仪器第83-84页
        4.2.4 培养基和溶液配方第84页
        4.2.5 实验方法第84-88页
        4.2.6 分析测定方法第88-89页
    4.3 结果与讨论第89-99页
        4.3.1 荧光定量PCR检测第89-91页
        4.3.2 重组质粒构建、鉴定与转化第91-92页
        4.3.3 重组菌株丁酸耐受性的变化第92-93页
        4.3.4 C.tyrobutyricum补料分批发酵动力学第93-97页
        4.3.5 ATCC25755/groESL中丁酸代谢关键酶活力变化第97-99页
    4.4 本章小结第99-101页
第五章 过表达ClassI型热激蛋白基因groESL增强C.tyrobutyricum对木质纤维素水解液的利用第101-119页
    5.1 引言第101-102页
    5.2 实验材料与方法第102-107页
        5.2.1 菌株和质粒第102页
        5.2.2 试剂与仪器第102-103页
        5.2.3 培养基和溶液配方第103页
        5.2.4 实验方法第103-104页
        5.2.5 分析测定方法第104-107页
    5.3 结果与讨论第107-117页
        5.3.1 木质纤维素的酶解糖化第107页
        5.3.2 以纤维素水解液为底物摇瓶发酵产丁酸第107-112页
        5.3.3 纤维素水解衍生抑制物毒性测试第112-114页
        5.3.4 以CSH和RSH为底物游离细胞发酵产丁酸第114-117页
    5.4 本章小结第117-119页
第六章 C.tyrobutyricum中表达短链脱氢酶/还原酶和醛酮还原酶对糠醛耐受性的影响第119-135页
    6.1 引言第119-120页
    6.2 实验材料与方法第120-124页
        6.2.1 菌株和质粒第120页
        6.2.2 本章所用引物第120-121页
        6.2.3 试剂与仪器第121页
        6.2.4 培养基和溶液配方第121页
        6.2.5 实验方法第121-124页
        6.2.6 分析测定方法第124页
    6.3 结果与讨论第124-133页
        6.3.1 糠醛对丁酸发酵的影响第124-127页
        6.3.2 重组质粒的构建、鉴定与转化第127-128页
        6.3.3 重组菌株SDS-PAGE检测第128-129页
        6.3.4 重组菌株糠醛耐受性的变化第129-131页
        6.3.5 重组菌株糠醛还原相关酶活性检测第131-132页
        6.3.6 以玉米芯水解液为底物摇瓶发酵产丁酸第132-133页
    6.4 本章小结第133-135页
结论与展望第135-139页
    结论第135-136页
    创新性成果第136-137页
    展望第137-139页
参考文献第139-164页
攻读博士学位期间取得的研究成果第164-166页
致谢第166-167页
附件第167页

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