| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-40页 |
| 1.1 酵母细胞壁结构和组成概述 | 第14-29页 |
| 1.1.1 酵母细胞壁的结构 | 第14-16页 |
| 1.1.2 酵母细胞壁多糖的简介 | 第16-19页 |
| 1.1.3 酵母细胞壁蛋白的分类及功能介绍 | 第19-27页 |
| 1.1.4 酵母GPI型蛋白的简介 | 第27-29页 |
| 1.2 环境胁迫下酵母细胞的响应及耐受机制 | 第29-34页 |
| 1.2.1 渗透压胁迫下酵母细胞的响应及耐受机制 | 第29-30页 |
| 1.2.2 乙醇胁迫下酵母细胞的响应及耐受机制 | 第30-31页 |
| 1.2.3 氧化应激下酵母细胞的响应及耐受机制 | 第31-33页 |
| 1.2.4 热胁迫下酵母细胞的响应及耐受机制 | 第33-34页 |
| 1.3 酵母表面展示技术及应用 | 第34-38页 |
| 1.3.1 酵母表面展示技术的简介 | 第34-35页 |
| 1.3.2 酵母表面展示技术的应用 | 第35-38页 |
| 1.4 本课题的研究意义及主要研究内容 | 第38-40页 |
| 1.4.1 本课题的研究意义 | 第38-39页 |
| 1.4.2 本课题的主要研究内容 | 第39-40页 |
| 第二章 毕赤酵母GPI型蛋白缺失菌株文库的构建及筛选 | 第40-67页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 材料与设备 | 第41-45页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和引物 | 第41-42页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.4 培养基与溶液 | 第44-45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-51页 |
| 2.3.1 GPI型蛋白缺失菌株文库的构建 | 第45-48页 |
| 2.3.2 菌株的生长状态分析 | 第48-49页 |
| 2.3.3 菌株的细胞壁多糖含量分析 | 第49-50页 |
| 2.3.4 菌株的表面疏水性分析 | 第50-51页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第51-66页 |
| 2.4.1 毕赤酵母GPI型蛋白的基因敲除及鉴定 | 第51-56页 |
| 2.4.2 不同碳源对缺失菌株生长的影响 | 第56-60页 |
| 2.4.3 缺失菌株对酵母细胞壁多糖含量的影响 | 第60-64页 |
| 2.4.4 缺失菌株对酵母细胞表面疏水性的影响 | 第64-66页 |
| 2.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第三章 甲醇耐受菌株的细胞壁蛋白质组学分析 | 第67-89页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 材料与设备 | 第68-69页 |
| 3.2.1 菌株 | 第68页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第68页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.4 培养基与溶液 | 第69页 |
| 3.3 实验方法 | 第69-73页 |
| 3.3.1 甲醇耐受菌株的培养 | 第69页 |
| 3.3.2 毕赤酵母细胞壁蛋白的提取及质控 | 第69-70页 |
| 3.3.3 毕赤酵母细胞壁蛋白的处理与标记 | 第70-71页 |
| 3.3.4 肽段的分离及检测 | 第71-72页 |
| 3.3.5 质谱数据处理及生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第73-88页 |
| 3.4.1 甲醇耐受菌株的生长 | 第73-74页 |
| 3.4.2 细胞壁蛋白样品的制备、处理与鉴定 | 第74-77页 |
| 3.4.3 细胞壁蛋白的生物信息学分析 | 第77-84页 |
| 3.4.4 甲醇胁迫条件下耐受菌株的细胞壁蛋白响应 | 第84-88页 |
| 3.5 本章小结 | 第88-89页 |
| 第四章 甲醇耐受菌株的转录组学分析 | 第89-113页 |
| 4.1 引言 | 第89-90页 |
| 4.2 材料与设备 | 第90-91页 |
| 4.2.1 菌株 | 第90页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第90页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第90页 |
| 4.2.4 培养基与溶液 | 第90-91页 |
| 4.3 实验方法 | 第91-94页 |
| 4.3.1 甲醇耐受性菌株的培养 | 第91页 |
| 4.3.2 毕赤酵母总RNA的提取和检测 | 第91-92页 |
| 4.3.3 酵母转录组文库的构建及测序 | 第92-93页 |
| 4.3.4 基因的鉴定及定量 | 第93-94页 |
| 4.3.5 差异表达基因的分析 | 第94页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第94-112页 |
| 4.4.1 甲醇耐受菌株的生长 | 第94-95页 |
| 4.4.2 毕赤酵母RNA样品的制备、处理与鉴定 | 第95-99页 |
| 4.4.3 毕赤酵母GPI型蛋白相关基因的转录组学分析 | 第99-101页 |
| 4.4.4 甲醇胁迫条件下耐受菌株的转录组学分析 | 第101-110页 |
| 4.4.5 转录组数据的验证 | 第110-112页 |
| 4.5 本章小结 | 第112-113页 |
| 第五章 表面疏水性对毕赤酵母细胞及表达脂肪酶的影响 | 第113-140页 |
| 5.1 引言 | 第113-114页 |
| 5.2 材料与设备 | 第114-116页 |
| 5.2.1 菌株、质粒和引物 | 第114页 |
| 5.2.2 主要仪器与设备 | 第114-115页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第115-116页 |
| 5.2.4 培养基与溶液 | 第116页 |
| 5.3 实验方法 | 第116-124页 |
| 5.3.1 表面展示脂肪酶的重组质粒的构建 | 第116-118页 |
| 5.3.2 表面展示脂肪酶的毕赤酵母重组菌株构建及表达 | 第118-119页 |
| 5.3.3 毕赤酵母表面脂肪酶性质的检测 | 第119-121页 |
| 5.3.4 表面展示疏水蛋白的毕赤酵母重组菌株构建及表达 | 第121-122页 |
| 5.3.5 展示疏水蛋白的毕赤酵母重组菌株表面性质检测 | 第122-123页 |
| 5.3.6 表面共展示疏水蛋白和脂肪酶菌株的重组菌株的性质检测 | 第123-124页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第124-139页 |
| 5.4.1 强疏水性缺失菌株的筛选 | 第124页 |
| 5.4.2 强疏水性菌株对展示脂肪酶CALB的影响 | 第124-128页 |
| 5.4.3 毕赤酵母的疏水蛋白修饰及对细胞表面的影响 | 第128-132页 |
| 5.4.4 疏水蛋白修饰对毕赤酵母共展示脂肪酶CALB的影响 | 第132-139页 |
| 5.5 本章小结 | 第139-140页 |
| 结论与展望 | 第140-143页 |
| 结论 | 第140-141页 |
| 本论文创新点 | 第141页 |
| 展望 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-159页 |
| 附录 | 第159-167页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第167-168页 |
| 致谢 | 第168-169页 |
| 附件 | 第169页 |
