| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 甘露聚糖 | 第12页 |
| 1.2 β-甘露聚糖酶介绍 | 第12-16页 |
| 1.2.1 β-甘露聚糖酶的定义 | 第12-13页 |
| 1.2.2 β-甘露聚糖酶的催化机制 | 第13-14页 |
| 1.2.3 β-甘露聚糖酶的来源及性质 | 第14-16页 |
| 1.3 β-甘露聚糖酶的分子生物学研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 β-甘露聚糖酶基因的克隆 | 第16-17页 |
| 1.3.2 β-甘露聚糖酶其序列分析 | 第17-18页 |
| 1.3.3 β-甘露聚糖酶的表达 | 第18页 |
| 1.4 β-甘露聚糖酶的应用 | 第18-21页 |
| 1.4.1 β-甘露聚糖酶在饲料工业中的应用 | 第19页 |
| 1.4.2 β-甘露聚糖酶在食品工业中的应用 | 第19页 |
| 1.4.3 β-甘露聚糖酶在造纸工业中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4.4 β-甘露聚糖酶在石油开采中的应用 | 第20页 |
| 1.4.5 β-甘露聚糖酶在洗涤剂中的应用 | 第20页 |
| 1.4.6 β-甘露聚糖酶在纺织工业中的应用 | 第20页 |
| 1.4.7 β-甘露聚糖酶在烟草业中的应用 | 第20-21页 |
| 1.4.8 β-甘露聚糖酶作为工具酶的应用 | 第21页 |
| 1.4.9 β-甘露聚糖酶的其它应用 | 第21页 |
| 1.5 本课题研究内容与目的意义 | 第21-23页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.5.2 目的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 β-甘露聚糖酶基因的克隆和异源表达 | 第23-46页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料 | 第23-28页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 主要化学试剂 | 第23-25页 |
| 2.2.3 培养基和试剂的配置 | 第25-27页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2.5 所用引物及序列 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-37页 |
| 2.3.1 菌株活化 | 第28页 |
| 2.3.2 B19基因组的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 克隆载体PMD19-T-ManE的构建 | 第29-32页 |
| 2.3.4 重组质粒pET28a(+)-ManE的构建 | 第32-35页 |
| 2.3.5 β-甘露聚糖酶基因序列的生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 2.3.6 重组蛋白的异源表达 | 第36页 |
| 2.3.7 表达蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第37-44页 |
| 2.4.1 产气肠杆菌B19基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.4.2 β-甘露聚糖酶基因的扩增 | 第38页 |
| 2.4.3 克隆载体pMD19-T-ManE的验证 | 第38-40页 |
| 2.4.4 表达载体pET28a(+)-ManE的验证 | 第40-41页 |
| 2.4.5 β-甘露聚糖酶基因序列分析 | 第41-43页 |
| 2.4.6 生物信息学分析 | 第43-44页 |
| 2.4.7 蛋白酶异源表达的SDS-PAGE检测 | 第44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 重组酶异源表达条件优化及酶学性质研究 | 第46-65页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.2.1 菌种 | 第46页 |
| 3.2.2 主要化学试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.3 试剂配制 | 第47-48页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.3.1 不同温度对重组酶表达量的影响 | 第48页 |
| 3.3.2 不同IPTG诱导浓度对重组酶表达量的影响 | 第48页 |
| 3.3.3 不同培养时间对重组酶表达量的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.4 重组酶的分离纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.5 蛋白质溶液浓度测定 | 第50-51页 |
| 3.3.6 β-甘露聚糖酶酶活力的测定 | 第51-52页 |
| 3.3.7 酶学性质研究 | 第52-53页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第53-63页 |
| 3.4.1 温度对重组酶异源表达量的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.2 IPTG浓度对重组酶异源表达量的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.3 诱导时间对重组酶异源表达量的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.4 标准曲线的绘制 | 第56-57页 |
| 3.4.5 重组酶的纯化 | 第57-58页 |
| 3.4.6 酶学性质 | 第58-63页 |
| 3.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第四章 解淀粉芽孢杆菌DC12转化的探究 | 第65-83页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 材料 | 第65-69页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第65-66页 |
| 4.2.2 主要化学试剂 | 第66页 |
| 4.2.3 培养基与缓冲液的配制 | 第66-68页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第68-69页 |
| 4.3 试验方法 | 第69-75页 |
| 4.3.1 克隆载体pMD18-T-tyb的构建 | 第69-72页 |
| 4.3.2 重组质粒pKSV7-tyb的构建 | 第72-73页 |
| 4.3.3 解淀粉芽孢杆菌FZB42感受态细胞制备及转化 | 第73-74页 |
| 4.3.4 解淀粉芽孢杆菌DC12感受态细胞制备及转化 | 第74-75页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第75-81页 |
| 4.4.1 基因组DNA的提取 | 第75-76页 |
| 4.4.2 上下游同源臂的扩增 | 第76页 |
| 4.4.3 扩增同源臂tyb | 第76-77页 |
| 4.4.4 克隆载体pMD18-T-tyb的验证 | 第77-78页 |
| 4.4.5 重组质粒pKSV7-tyb的验证 | 第78-80页 |
| 4.4.6 重组质粒pKSV7-tyb转化解淀粉芽孢杆菌FZB | 第80-81页 |
| 4.4.7 重组质粒pKSV7-tyb转化解淀粉芽孢杆菌DC | 第81页 |
| 4.5 本章小结 | 第81-83页 |
| 结论与展望 | 第83-85页 |
| 本文主要结论 | 第83-84页 |
| 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附表 | 第97页 |
