| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 IBV的病原生物学研究 | 第12-14页 |
| 1.1.1 传染性支气管炎病毒的分类 | 第12页 |
| 1.1.2 传染性支气管炎病毒的形态 | 第12页 |
| 1.1.3 传染性支气管炎病毒的理化及生物特性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 传染性性支气管炎病毒国内外流行情况 | 第13-14页 |
| 1.2 IBV的基因组结构 | 第14-21页 |
| 1.2.1 传染性支气管炎病毒结构蛋白生物学功能 | 第15-17页 |
| 1.2.2 传染性支气管炎病毒非结构蛋白生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.2.3 传染性支气管炎病毒非编码区生物学功能 | 第18页 |
| 1.2.4 IBV的全基因组序列研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3 IB的病理变化 | 第21-22页 |
| 1.3.1 传染性支气管炎病毒的致病性 | 第21页 |
| 1.3.2 传染性支气管炎病毒的临床症状及病理变化 | 第21-22页 |
| 1.4 IB的诊断和防治 | 第22-23页 |
| 1.4.1 传染性支气管炎的诊断 | 第22-23页 |
| 1.4.2 传染性支气管炎的防治 | 第23页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 实验动物及SPF鸡胚 | 第25页 |
| 2.1.2 毒株、菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 试验试剂及培养基的配制 | 第25-27页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-41页 |
| 2.2.1 病毒的增殖培养 | 第28页 |
| 2.2.2 病毒总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 HH06株IBV全基因组内部片段的RT-PCR分段扩增 | 第28-30页 |
| 2.2.4 RACE法获取5’末端和3’末端非编码区片段 | 第30-33页 |
| 2.2.5 目的基因的克隆及序列测定 | 第33-36页 |
| 2.2.6 IBV全基因组序列的生物信息学分析 | 第36页 |
| 2.2.7 IBV M部分基因的亚克隆及重组表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.8 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.9 重组M1蛋白的多克隆抗体的制备 | 第38页 |
| 2.2.10 M1蛋白多克隆抗体的生物学功能检测 | 第38-40页 |
| 2.2.11 数据统计 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-72页 |
| 3.1 全基因组RT-PCR分段扩增结果 | 第41页 |
| 3.2 重组质粒的鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.1 重组质粒的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 序列测定及拼接 | 第43-44页 |
| 3.4 全基因组序列的生物信息学分析 | 第44-67页 |
| 3.4.1 基因组结构分析 | 第44-46页 |
| 3.4.2 序列同源性分析 | 第46页 |
| 3.4.3 系统进化树分析 | 第46-48页 |
| 3.4.4 IBV S基因裂解位点分析比较 | 第48页 |
| 3.4.5 重组分析 | 第48-49页 |
| 3.4.6 压力选折分析 | 第49-67页 |
| 3.5 重组表达质粒PET30A-M1和PVAX-M1的构建 | 第67页 |
| 3.6 PET-M1蛋白的表达及WESTERN BLOT分析 | 第67-69页 |
| 3.7 M1蛋白多克隆抗体制备及其鉴定 | 第69-72页 |
| 3.7.1 M1蛋白多克隆抗体效价检测和Western blot分析 | 第69页 |
| 3.7.2 M1蛋白多克隆抗体IFA检测 | 第69-70页 |
| 3.7.3 病毒感染抑制实验 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| 4.1 全基因组分段扩增 | 第72页 |
| 4.2 生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 4.3 M蛋白表达分析 | 第73-74页 |
| 4.4 M蛋白生物学功能分析 | 第74-76页 |
| 5 结论 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第85页 |
