| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-47页 |
| 1. 线虫对饥饿的应答机制研究进展 | 第12-27页 |
| 1.1 在饥饿过程中线虫的行为改变和形态改变 | 第12-14页 |
| 1.1.1 线虫社会学行为出现应答饥饿 | 第12-13页 |
| 1.1.2 饥饿改变线虫的咽部行为 | 第13页 |
| 1.1.3 饥饿导致线虫发育过程中出现形态变化 | 第13-14页 |
| 1.2 饥饿改变代谢速率 | 第14-17页 |
| 1.2.1 TOR调控生物体的代谢速率 | 第14-16页 |
| 1.2.2 AMPK调控生物体的代谢速率 | 第16-17页 |
| 1.3 脂肪代谢在饥饿抵抗中的作用 | 第17-24页 |
| 1.3.1 HLH-30信号在线虫饥饿抵抗中的作用 | 第18-20页 |
| 1.3.2 IRE-1/HSP-4信号途径在线虫饥饿抵抗中的作用 | 第20-22页 |
| 1.3.3 NHR-49信号途径参与饥饿情况下脂肪酸的β-氧化 | 第22-24页 |
| 1.4 饥饿诱导自噬的发生 | 第24-27页 |
| 2 生物胺(biogenic amines) | 第27-36页 |
| 2.1 章鱼胺 | 第29-35页 |
| 2.1.1 章鱼胺的合成 | 第32-33页 |
| 2.1.2 章鱼胺的生理作用 | 第33-35页 |
| 2.2 章鱼胺在线虫中的受体 | 第35-36页 |
| 3. ROS | 第36页 |
| 4. 核受体 | 第36-45页 |
| 4.1 DAF-12 概述 | 第38-39页 |
| 4.2 Dafachronic acids(DA) -DAF-12的配体 | 第39-40页 |
| 4.3 DAF-12的功能 | 第40-45页 |
| 4.3.1 DAF-12调节dauer幼虫的形成 | 第40-44页 |
| 4.3.2 DAF-12参与线虫寿命的调节 | 第44页 |
| 4.3.3 DAF-12在压力抵抗中的作用 | 第44-45页 |
| 5 本文研究的目的与意义 | 第45-47页 |
| 第二章 章鱼胺信号介导脂肪降解抵抗饥饿 | 第47-104页 |
| 1. 前言 | 第47-48页 |
| 2. 材料与方法 | 第48-78页 |
| 2.1 实验材料(仪器、试剂和培养基) | 第48-55页 |
| 2.1.1 实验所用主要仪器 | 第48-49页 |
| 2.1.2 实验所用主要试剂 | 第49-51页 |
| 2.1.3 实验所用主要试剂盒 | 第51-52页 |
| 2.1.4 实验所用线虫突变株 | 第52-53页 |
| 2.1.5 实验所用菌株 | 第53页 |
| 2.1.6 实验所用主要溶液与培养基及其相关配置方法 | 第53-55页 |
| 2.2 实验方法 | 第55-78页 |
| 2.2.1 NGM固体培养基平板的制作(300ml) | 第55-56页 |
| 2.2.2 LB固体培养基平板的制作 | 第56页 |
| 2.2.3 饥饿分析平板的制备(100ml) | 第56页 |
| 2.2.4 固体培养基培养线虫 | 第56-57页 |
| 2.2.5 液体培养基培养线虫(此方法适用于培养大量线虫) | 第57页 |
| 2.2.6 线虫同步化 | 第57-58页 |
| 2.2.7 线虫的冻存与复苏 | 第58-59页 |
| 2.2.8 线虫的饥饿实验 | 第59页 |
| 2.2.9 线虫总RNA提取实验 | 第59-60页 |
| 2.2.10 线虫cDNA的制备(参考TAKARA公司试剂盒) | 第60页 |
| 2.2.11 Real Time PCR荧光定量实验:RT-PCR(即Real Time PCR)反应 | 第60页 |
| 2.2.12 荧光显微镜拍照方法 | 第60-61页 |
| 2.2.13 线虫体内章鱼胺含量的测定实验 | 第61-62页 |
| 2.2.14 线虫脂肪的检测方法 | 第62-65页 |
| 2.2.15 化学转化实验 | 第65页 |
| 2.2.16 线虫基因组提取(参考天根生化公司的试剂盒) | 第65页 |
| 2.2.17 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验 | 第65-69页 |
| 2.2.18 lips-6干扰菌株的构建 | 第69-70页 |
| 2.2.19 Plips-6::GFP质粒的构建 | 第70-71页 |
| 2.2.20 Ptbh-1::GFP质粒的构建 | 第71-72页 |
| 2.2.21 Pdaf-12::daf-12::GFP质粒的构建 | 第72-73页 |
| 2.2.22 Ptbh-1::daf-12::GFP质粒的构建 | 第73-74页 |
| 2.2.23 Ptbh-1::tbh-1::GFP转基因线虫的构建 | 第74页 |
| 2.2.24 Pges-1::lips-6::GFP质粒的构建 | 第74-75页 |
| 2.2.25 Pges-l::ser-3::GFP质粒的构建 | 第75-76页 |
| 2.2.26 氧化应激分析实验 | 第76-77页 |
| 2.2.27 热击分析实验 | 第77-78页 |
| 3. 结果 | 第78-102页 |
| 3.1 饥饿情况下,DAF-12主要以DAF-12/DIN-1形式存在 | 第78-79页 |
| 3.2 DAF-12/DIN-1复合物以脂肪降解的方式促进线虫抵抗饥饿 | 第79-81页 |
| 3.3 饥饿过程中,增加的章鱼胺信号促进线虫抵抗饥饿 | 第81-83页 |
| 3.4 章鱼胺上调脂酶lips-6的的表达,促进脂肪的降解 | 第83-90页 |
| 3.5 饥饿状态下,章鱼胺通过受体SER-3介导脂肪降解 | 第90-96页 |
| 3.6 饥饿状态下,DAF-12/DIN-1复合物调节tbh-1的表达 | 第96-99页 |
| 3.7 饥饿状态下,DAF-12/DIN-1信号通过章鱼胺信号调节脂肪降解 | 第99-102页 |
| 4. 本章讨论 | 第102-104页 |
| 第三章 抗氧化防御反应在线虫饥饿抵抗中的作用 | 第104-128页 |
| 1. 前言 | 第104-105页 |
| 2. 材料与方法 | 第105-115页 |
| 2.1 实验材料(仪器、试剂和培养基) | 第105-107页 |
| 2.2 实验方法 | 第107-115页 |
| 2.2.1 线虫同步化 | 第108页 |
| 2.2.2 线虫RNAi | 第108-109页 |
| 2.2.3 线虫总RNA提取实验 | 第109-110页 |
| 2.2.4 线虫cDNA的制备(参考TAKARA公司试剂盒) | 第110页 |
| 2.2.5 Real Time PCR荧光定量实验:RT-PCR(即Real Time PCR)反应(参考TAKARA公司试剂盒) | 第110页 |
| 2.2.6 线虫凋亡检测 | 第110页 |
| 2.2.7 线虫ROS检测(H2DCF-DA染色检测) | 第110-111页 |
| 2.2.8 线虫ROS的检测(ROS定量检测) | 第111页 |
| 2.2.9 线虫ROS的检测(二氢乙锭染料检测,简称DHE染色检测) | 第111-112页 |
| 2.2.10 线虫ROS检测(CellROX(?) Deep Red Reagent检测) | 第112页 |
| 2.2.11 线虫组织坏死检测(吖啶橙染色检测) | 第112-113页 |
| 2.2.12 线虫组织坏死检测(荧光素钠染色检测) | 第113页 |
| 2.2.13 线虫组织坏死检测(DIC成像观察) | 第113-114页 |
| 2.2.14 饥饿生存分析 | 第114-115页 |
| 3. 结果 | 第115-126页 |
| 3.1 饥饿状态下,daf-12,din-1和tbh-1突变能导致组织坏死 | 第115-117页 |
| 3.2 在daf-12和din-1突变线虫中,坏死参与饥饿导致的线虫死亡 | 第117-119页 |
| 3.3 饥饿情况下,DAF-12/DIN-1 调节抗氧化基因的表达,促进线虫对饥饿的抵抗 | 第119-121页 |
| 3.4 饥饿状态下,daf-12或din-1突变导致活性氧水平增加 | 第121-126页 |
| 4. 本章讨论 | 第126-128页 |
| 第四章 全文总结 | 第128-130页 |
| 附录 | 第130-140页 |
| 附表一: 英文名词缩写表 | 第130-132页 |
| 附表二: 课题研究中用于载体构建的质粒图谱 | 第132-135页 |
| 附表三: 章鱼胺检测中的LC-MS-MS峰图 | 第135-139页 |
| 附表四: 课题研究中所用部分引物序列 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-153页 |
| 博士期间已经发表的文章 | 第153-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
