摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5页 |
第1章 引言 | 第9-19页 |
1.1 细菌中的耐汞机制 | 第9-10页 |
1.1.1 耐汞机制的起源 | 第9-10页 |
1.2 Meroperon简介 | 第10-15页 |
1.2.1 Meroperon的关键组分及相关特性 | 第10-12页 |
1.2.2 Meroperon的调控机制及工作模型 | 第12-13页 |
1.2.3 Meroperon系统几种转运蛋白的研究现状 | 第13-15页 |
1.3 MerC蛋白的二级拓扑结构及功能研究 | 第15-17页 |
1.3.1 MerC蛋白的二级拓扑结构及生物学功能 | 第15-16页 |
1.3.2 MerC蛋白性质研究 | 第16-17页 |
1.4 本文的研究意义 | 第17-19页 |
第2章 实验材料与方法 | 第19-35页 |
2.1 实验材料 | 第19-22页 |
2.1.1 基因,菌种,质粒和工具酶 | 第19-20页 |
2.1.2 试剂与耗材 | 第20-21页 |
2.1.3 实验设备与仪器 | 第21-22页 |
2.2 实验方法 | 第22-35页 |
2.2.1 LB(Luria-Bertani)液体培养基制备 | 第22页 |
2.2.2 LB(Luria-Bertani)固体培养基平板的制备 | 第22页 |
2.2.3 聚合酶链式反应 | 第22-23页 |
2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第23-24页 |
2.2.5 胶回收 | 第24页 |
2.2.6 目的片段酶切和载体的线性化 | 第24页 |
2.2.7 连接反应 | 第24页 |
2.2.8 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
2.2.9 连接产物转化感受态细胞 | 第25页 |
2.2.10 重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
2.2.11 质粒小量提取 | 第26页 |
2.2.12 MerC蛋白的表达及提取 | 第26页 |
2.2.13 蛋白质的纯化 | 第26-28页 |
2.2.14 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第28-30页 |
2.2.15 蛋白质的结晶 | 第30-31页 |
2.2.16 晶体优化 | 第31-32页 |
2.2.17 分析超离心技术测定蛋白分子量 | 第32-35页 |
第3章 MerC蛋白的表达纯化、鉴定与结晶 | 第35-55页 |
3.1 MerC蛋白及截短体的初步表达纯化 | 第35-39页 |
3.1.1 膜蛋白重组表达体系简介 | 第35-36页 |
3.1.2 不同菌种来源的MerC及MerC截短体的表达纯化对比 | 第36-39页 |
3.2 MerC蛋白表达条件的优化 | 第39-43页 |
3.2.1 温度对MerC蛋白表达的影响 | 第39-41页 |
3.2.2 菌株对MerC蛋白表达的影响 | 第41-43页 |
3.3 MerC蛋白结晶条件筛选及晶体优化 | 第43-46页 |
3.3.1 传统膜蛋白结晶方法 | 第44页 |
3.3.2 新型膜蛋白结晶方法 | 第44页 |
3.3.3 MerC蛋白结晶条件筛选 | 第44-45页 |
3.3.4 MerC蛋白晶体优化 | 第45-46页 |
3.4 MerC蛋白纯化过程去垢剂的筛选和置换 | 第46-55页 |
3.4.1 去垢剂在膜蛋白提取、纯化和结晶中的应用 | 第46-49页 |
3.4.2 MerC蛋白置换去垢剂 | 第49-52页 |
3.4.3 MerC蛋白置换去垢剂后结晶条件筛选及晶体优化 | 第52-55页 |
第4章 MerC蛋白在溶液中聚集状态的表征 | 第55-59页 |
4.1 M3蛋白浓度影响凝胶过滤层析的迁移率 | 第55-57页 |
4.2 MerC蛋白在溶液中的表现形态为二聚体 | 第57-59页 |
第5章 结果与讨论 | 第59-61页 |
参考文献 | 第61-69页 |
发表论文和参加科研情况的说明 | 第69-71页 |
致谢 | 第71-72页 |