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汞转运蛋白的表达纯化、鉴定与结晶

摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
第1章 引言第9-19页
    1.1 细菌中的耐汞机制第9-10页
        1.1.1 耐汞机制的起源第9-10页
    1.2 Meroperon简介第10-15页
        1.2.1 Meroperon的关键组分及相关特性第10-12页
        1.2.2 Meroperon的调控机制及工作模型第12-13页
        1.2.3 Meroperon系统几种转运蛋白的研究现状第13-15页
    1.3 MerC蛋白的二级拓扑结构及功能研究第15-17页
        1.3.1 MerC蛋白的二级拓扑结构及生物学功能第15-16页
        1.3.2 MerC蛋白性质研究第16-17页
    1.4 本文的研究意义第17-19页
第2章 实验材料与方法第19-35页
    2.1 实验材料第19-22页
        2.1.1 基因,菌种,质粒和工具酶第19-20页
        2.1.2 试剂与耗材第20-21页
        2.1.3 实验设备与仪器第21-22页
    2.2 实验方法第22-35页
        2.2.1 LB(Luria-Bertani)液体培养基制备第22页
        2.2.2 LB(Luria-Bertani)固体培养基平板的制备第22页
        2.2.3 聚合酶链式反应第22-23页
        2.2.4 琼脂糖凝胶电泳第23-24页
        2.2.5 胶回收第24页
        2.2.6 目的片段酶切和载体的线性化第24页
        2.2.7 连接反应第24页
        2.2.8 感受态细胞的制备第24-25页
        2.2.9 连接产物转化感受态细胞第25页
        2.2.10 重组质粒的鉴定第25-26页
        2.2.11 质粒小量提取第26页
        2.2.12 MerC蛋白的表达及提取第26页
        2.2.13 蛋白质的纯化第26-28页
        2.2.14 SDS-PAGE凝胶电泳第28-30页
        2.2.15 蛋白质的结晶第30-31页
        2.2.16 晶体优化第31-32页
        2.2.17 分析超离心技术测定蛋白分子量第32-35页
第3章 MerC蛋白的表达纯化、鉴定与结晶第35-55页
    3.1 MerC蛋白及截短体的初步表达纯化第35-39页
        3.1.1 膜蛋白重组表达体系简介第35-36页
        3.1.2 不同菌种来源的MerC及MerC截短体的表达纯化对比第36-39页
    3.2 MerC蛋白表达条件的优化第39-43页
        3.2.1 温度对MerC蛋白表达的影响第39-41页
        3.2.2 菌株对MerC蛋白表达的影响第41-43页
    3.3 MerC蛋白结晶条件筛选及晶体优化第43-46页
        3.3.1 传统膜蛋白结晶方法第44页
        3.3.2 新型膜蛋白结晶方法第44页
        3.3.3 MerC蛋白结晶条件筛选第44-45页
        3.3.4 MerC蛋白晶体优化第45-46页
    3.4 MerC蛋白纯化过程去垢剂的筛选和置换第46-55页
        3.4.1 去垢剂在膜蛋白提取、纯化和结晶中的应用第46-49页
        3.4.2 MerC蛋白置换去垢剂第49-52页
        3.4.3 MerC蛋白置换去垢剂后结晶条件筛选及晶体优化第52-55页
第4章 MerC蛋白在溶液中聚集状态的表征第55-59页
    4.1 M3蛋白浓度影响凝胶过滤层析的迁移率第55-57页
    4.2 MerC蛋白在溶液中的表现形态为二聚体第57-59页
第5章 结果与讨论第59-61页
参考文献第61-69页
发表论文和参加科研情况的说明第69-71页
致谢第71-72页

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