| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 本文缩略词表 | 第12-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-46页 |
| 1. 骨骼肌纤维发育及调节肌纤维类型的相关信号通路 | 第20-31页 |
| 1.1. 骨骼肌的起源及演变过程 | 第21-23页 |
| 1.2. 骨骼肌纤维形成及肌纤维类型分类 | 第23-25页 |
| 1.3. 调控骨骼肌纤维类型的信号通路及转录因子 | 第25-31页 |
| 1.3.1. Calcium-NFAT/MEF2和Calcium-CaMK/MEF2信号 | 第25-26页 |
| 1.3.2. AMPK/PGC-1α信号 | 第26-27页 |
| 1.3.3. PPARδ/PGC-1α信号 | 第27-28页 |
| 1.3.4. MAPK信号 | 第28-29页 |
| 1.3.5. WNT信号 | 第29-30页 |
| 1.3.6. miRNA and lncRNA调控MYH表达 | 第30-31页 |
| 1.3.7. 其他转录因子 | 第31页 |
| 2. 骨骼肌再生 | 第31-37页 |
| 2.1. 卫星细胞异质性 | 第32-34页 |
| 2.1.1. 卫星细胞来源不同 | 第32-33页 |
| 2.1.2. 卫星细胞分子特性 | 第33页 |
| 2.1.3. 卫星细胞功能特异性 | 第33-34页 |
| 2.2. Pax3/Pax7不同生物学功能及调控的不同下游靶基因 | 第34-36页 |
| 2.3. Zac1在生肌过程中的作用 | 第36-37页 |
| 3. 维生素D_3调控骨骼肌纤维类型组成及分子机制 | 第37-45页 |
| 3.1. 维生素D_3影响肌细胞增殖和分化 | 第37-38页 |
| 3.2. 维生素D_3调控骨骼肌纤维类型 | 第38-39页 |
| 3.3. 维生素D_3在生肌过程中的信号途径 | 第39-42页 |
| 3.4. 维生素D_3调控甲状腺激素影响骨骼肌纤维类型 | 第42-45页 |
| 3.4.1. 维生素D_3影响甲状腺激素 | 第42-43页 |
| 3.4.2. 甲状腺激素在骨骼肌中的作用 | 第43-44页 |
| 3.4.3. T_3调节骨骼肌纤维类型 | 第44-45页 |
| 4. 现存在的问题 | 第45-46页 |
| 第二部分 本研究的目的、意义,内容及技术路线 | 第46-49页 |
| 1. 研究目的及意义 | 第46-47页 |
| 1.1. 研究目的 | 第46页 |
| 1.2. 研究意义 | 第46-47页 |
| 2. 研究内容及拟解决的科学问题 | 第47页 |
| 2.1. 研究内容 | 第47页 |
| 2.2. 研究目标 | 第47页 |
| 2.3. 拟解决的关键科学问题 | 第47页 |
| 3. 研究技术路线 | 第47-49页 |
| 第三部分 试验研究 | 第49-134页 |
| 试验一 Pax3~+和Pax7~+骨骼肌卫星细胞群的增殖、分化特性研究 | 第49-62页 |
| 1. 前言 | 第49-50页 |
| 2. 材料与方法 | 第50-52页 |
| 2.1. 试验动物及设计 | 第50页 |
| 2.2. 卫星细胞分离和流式细胞分选(FACS) | 第50页 |
| 2.3. 卫星细胞培养 | 第50-51页 |
| 2.4. Weston Blotting蛋白印记检测 | 第51页 |
| 2.5. 肌肉损伤模型 | 第51页 |
| 2.6. 免疫染色 | 第51-52页 |
| 2.7. 统计 | 第52页 |
| 3. 结果与分析 | 第52-60页 |
| 3.1. Pax3/Pax7分离卫星细胞群 | 第52-54页 |
| 3.2. 连续传代后卫星细胞亚群的自我更新能力 | 第54-56页 |
| 3.3. 卫星细胞群的增殖和再生潜力 | 第56-58页 |
| 3.4. 卫星细胞群的不同分化功能 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-61页 |
| 5. 小结 | 第61-62页 |
| 试验二 Zac1/GPR39磷酸化CaMK-Ⅱ决定Pax3和Pax7在生肌过程中的不同作用 | 第62-93页 |
| 1. 前言 | 第62-63页 |
| 2. 材料与方法 | 第63-68页 |
| 2.1. 细胞系,DNA构建体和抗体 | 第63-64页 |
| 2.2 质粒和siRNA转染 | 第64页 |
| 2.3. 逆转录病毒表达载体和感染 | 第64-65页 |
| 2.4. Western Blotting和免疫共沉淀(Co-IP) | 第65页 |
| 2.5. 免疫化学 | 第65-66页 |
| 2.6. RT-qPCR | 第66-67页 |
| 2.7. 移植分析和EdU细胞增殖测定 | 第67-68页 |
| 2.8. 步态分析 | 第68页 |
| 2.9. CaMK-Ⅱ和p-ERK1/2抑制剂 | 第68页 |
| 2.10. 统计分析 | 第68页 |
| 3. 结果 | 第68-88页 |
| 3.1. Pax7激活Zac1调控GPR39表达 | 第68-70页 |
| 3.2. Zac1/GPR39系统促进成肌分化 | 第70-74页 |
| 3.3. Zac1/GPR39系统调控纤维类型组成 | 第74-76页 |
| 3.4. 体内移植Pax7 RV/siZac1转染的细胞会延迟损伤肌肉修复 | 第76-80页 |
| 3.5. 步态动力学:移植转染细胞在体内修复损伤肌肉的效率 | 第80-82页 |
| 3.6. Zac /GRP39对纤维类型调控的信号网络 | 第82-85页 |
| 3.7. CaMK-Ⅱ磷酸化在Zac1/GPR39系统调节肌纤维类型组成中发挥关键作用 | 第85-88页 |
| 4. 讨论 | 第88-92页 |
| 5. 小结 | 第92-93页 |
| 试验三 Pcbp1调节肌细胞分化及肌纤维类型的信号途径 | 第93-114页 |
| 1. 前言 | 第93-94页 |
| 2. 材料与方法 | 第94-98页 |
| 2.1. 试验动物及设计(Pcbpl~(f/f)等位基因和小鼠模型的产生) | 第94页 |
| 2.2. 病毒生产 | 第94-95页 |
| 2.3. 细胞培养,siRNA转染和和病毒感染 | 第95页 |
| 2.4. RNA分离,RT-PCR和RT-qPCR | 第95-96页 |
| 2.5. Western Blotting和免疫共沉淀 | 第96-97页 |
| 2.6. miRNA Northern印迹 | 第97页 |
| 2.7. 单根肌纤维及原代成肌细胞分离培养 | 第97页 |
| 2.8. 免疫组化 | 第97-98页 |
| 2.9. 统计分析 | 第98页 |
| 3.结果与分析 | 第98-112页 |
| 3.1. Pcbp1在骨骼肌中动态表达 | 第98-99页 |
| 3.2. 抑制Pcbp1增强骨骼肌成肌细胞分化 | 第99-101页 |
| 3.3. 动物胚胎发育需要Pcbp1 | 第101-104页 |
| 3.4. Pcbp1是骨骼肌的生长和慢肌纤维发育所需的 | 第104-107页 |
| 3.5. 抑制Pcbp1减少卫星细胞的数量和增强原代成肌细胞的过早分化 | 第107-109页 |
| 3.6. Pcbp1与miRNA通路的组分相互作用 | 第109-111页 |
| 3.7. Pcbp1调节骨骼肌中的miRNA成熟 | 第111-112页 |
| 4. 讨论 | 第112-113页 |
| 5. 小结 | 第113-114页 |
| 试验四 维生素D_3抑制shh信号通路,释放甲状腺激素促进快肌生成 | 第114-134页 |
| 1. 前言 | 第114-115页 |
| 2. 材料和方法 | 第115-119页 |
| 2.1. 动物模型 | 第115页 |
| 2.2. 甲状腺激素测定 | 第115-116页 |
| 2.3. Weston Blotting蛋白印记检测 | 第116页 |
| 2.4. 体内电穿孔 | 第116-117页 |
| 2.5. 免疫化学 | 第117页 |
| 2.6. 分离单根肌纤维 | 第117页 |
| 2.7. HE染色 | 第117-118页 |
| 2.8. RT-qPCR | 第118-119页 |
| 2.9. 统计分析 | 第119页 |
| 3. 结果与分析 | 第119-131页 |
| 3.1. 维生素D_3调节甲状腺激素 | 第119-121页 |
| 3.2. 维生素D_3结合GPR39抑制shh信号,上调甲状腺激素T_3 | 第121-122页 |
| 3.3. 维生素D_3通过甲状腺激素调节骨骼肌形态 | 第122-124页 |
| 3.4. 维生素D_3通过甲状腺激素促进骨骼肌再生 | 第124-126页 |
| 3.5. 维生素D_3通过甲状腺激素增加卫星细胞含量并促进分化 | 第126-129页 |
| 3.6. 维生素D_3通过甲状腺激素改变骨骼肌纤维类型 | 第129-131页 |
| 4. 讨论 | 第131-133页 |
| 5. 小结 | 第133-134页 |
| 第四部分 总体讨论和结论 | 第134-143页 |
| 1. 总体讨论 | 第134-140页 |
| 2. 研究结论 | 第140-141页 |
| 3. 创新点 | 第141页 |
| 4. 研究不足和进一步研究内容 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-168页 |
| 致谢 | 第168-169页 |
| 作者简介 | 第169页 |
