| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 第一部分 Rho GTP酶在日本囊对虾先天免疫中的功能研究 | 第16-74页 |
| 第一章 综述无脊椎动物的先天免疫与小GTP酶 | 第16-27页 |
| (一) 无脊椎动物的先天免疫综述 | 第16-21页 |
| 1. 物理屏障 | 第16-17页 |
| 2. 体液免疫 | 第17-19页 |
| 3. 细胞免疫 | 第19-21页 |
| (二) 小GTP酶的分类及功能 | 第21-24页 |
| (三) Rho GTP酶概述 | 第24-26页 |
| (四) 本论文的科学问题与研究意义 | 第26-27页 |
| 第二章 Cdc42与精氨酸激酶相互作用抑制WSSV复制 | 第27-59页 |
| (一) 前言 | 第27-28页 |
| (二) 材料与方法 | 第28-39页 |
| 1. 实验动物与免疫刺激 | 第28页 |
| 2. 菌株、载体、试剂与仪器 | 第28-30页 |
| 3. MjCdc42与MjAK序列分析与基因克隆 | 第30页 |
| 4. 组织提取、总RNA提取与cDNA合成 | 第30-31页 |
| 5. 半定量PCR与实时定量PCR检测组织分布与表达模式 | 第31-32页 |
| 6. 体外重组表达与蛋白纯化 | 第32页 |
| 7. 双链RNA的制备与RNA干扰实验 | 第32-34页 |
| 8. 过表达实验 | 第34页 |
| 9. Western blotting检测病毒复制 | 第34-35页 |
| 10. WSSV绝对定量与病毒拷贝数测定 | 第35页 |
| 11. 抑制剂毒性检测与体内抑制实验 | 第35-36页 |
| 12. Pull-down实验与质谱分析 | 第36页 |
| 13. 三级结构模拟与蛋白质分子对接模拟分析 | 第36-37页 |
| 14. 免疫细胞化学实验 | 第37页 |
| 15. 对虾存活率检测实验 | 第37-38页 |
| 16. MjAK突变体的构建 | 第38页 |
| 17. MjAK酶活检测实验 | 第38-39页 |
| 18. 体内ATP含量测定实验 | 第39页 |
| (三) 实验结果 | 第39-56页 |
| 1. MjCdc42多重序列比对与系统进化树的构建 | 第39-42页 |
| 2. MjCdc42受到WSSV刺激后上调表达 | 第42-43页 |
| 3. MjCdc42抑制对虾体内WSSV复制 | 第43-45页 |
| 4. 注射Cdc42抑制剂(ML141与ZCL278)促进对虾体内WSSV复制 | 第45-46页 |
| 5. MjCdc42与精氨酸激酶相互作用 | 第46-48页 |
| 6. MjAK促进对虾体内WSSV复制 | 第48-50页 |
| 7. MjAK与病毒囊膜蛋白VP26相互作用 | 第50-52页 |
| 8. MjCdc42抑制病毒复制的能力依赖于与MjAK的相互作用 | 第52-53页 |
| 9. MjCdc42抑制MjAK产生ATP的激酶活性 | 第53-56页 |
| (四) 讨论 | 第56-59页 |
| 第三章 RhoA通过调控β-integrin介导的细胞吞噬抑制细菌感染 | 第59-74页 |
| (一) 前言 | 第59-60页 |
| (二) 材料与方法 | 第60-63页 |
| 1. 实验动物、弧菌刺激与组织提取 | 第60页 |
| 2. MjRhoA的基因克隆与序列分析 | 第60页 |
| 3. MjRhoA的重组表达、蛋白纯化与多克隆抗体的制备 | 第60-61页 |
| 4. 总RNA提取与cDNA合成 | 第61页 |
| 5. RT-PCR分析与qRT-PCR分析 | 第61-62页 |
| 6. 双链RNA合成与RNA干扰实验 | 第62页 |
| 7. 对虾存活率统计分析 | 第62页 |
| 8. 弧菌清除实验 | 第62页 |
| 9. 免疫细胞化学与细胞吞噬实验 | 第62-63页 |
| (三) 实验结果 | 第63-72页 |
| 1. MjRhoA全长序列分析、序列比对与系统进化树分析 | 第63-66页 |
| 2. 受到V.anguillarum刺激MjRhoA发生上调表达 | 第66-67页 |
| 3. MjRhoA抑制体内细菌增殖并增强对虾存活率 | 第67-69页 |
| 4. MjRhoA通过增强血细胞吞噬作用清除细菌 | 第69页 |
| 5. MjRhoA参与β-integrin介导的吞噬作用 | 第69-71页 |
| 6. β-integrin调控MjRhoA的抗细菌功能 | 第71-72页 |
| (四) 讨论 | 第72-74页 |
| 第二部分 对虾抗WSSV感染的训练免疫的诱导与机理研究 | 第74-106页 |
| 第一章 训练性先天免疫 | 第74-81页 |
| (一) 先天免疫记忆性的发现 | 第74-75页 |
| (二) 训练免疫的研究进展 | 第75-77页 |
| (三) 训练免疫的机理研究进展 | 第77-80页 |
| (四) 本论文的研究意义 | 第80-81页 |
| 第二章 对虾抗白斑综合征病毒训练免疫的诱导 | 第81-106页 |
| (一) 前言 | 第81-82页 |
| (二) 材料与方法 | 第82-86页 |
| 1. 实验动物与WSSV的准备 | 第82页 |
| 2. 对虾的训练免疫 | 第82-84页 |
| 3. 重组表达、纯化与内毒素的去除 | 第84-85页 |
| 4. 基因组DNA、总RNA的提取与cDNA的合成 | 第85页 |
| 5. 实时定量qRT-PCR实验 | 第85页 |
| 6. 病毒拷贝数的测定与存活率实验 | 第85-86页 |
| (三) 结果 | 第86-104页 |
| 1. 灭活病毒检测结果 | 第86页 |
| 2. 紫外灭活病毒在日本囊对虾中诱导训练免疫 | 第86-92页 |
| 3. 在对虾中筛选具有诱导训练免疫功能的WSSV囊膜蛋白 | 第92-93页 |
| 4. VP28重组蛋白诱导训练免疫的功能具有剂量依赖性 | 第93-95页 |
| 5. VP28诱导训练免疫的转录组分析结果 | 第95-101页 |
| 6. 紫外灭活WSSV诱导训练免疫筛选的差异基因同样可以被VP28诱导 | 第101-104页 |
| (四) 讨论 | 第104-106页 |
| 创新点总结 | 第106-108页 |
| 一、Rho GTP酶在日本囊对虾先天免疫中的功能 | 第106-107页 |
| 1. MjCdc42与MjAK相互作用抑制WSSV复制 | 第106页 |
| 2. MjRho通过参与β-integrin依赖的细胞吞噬抑制弧菌感染 | 第106-107页 |
| 二、WSSV囊膜蛋白VP28诱导日本囊对虾的训练免疫 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 在读期间发表论文 | 第122-123页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第123页 |
