| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 猪流行性腹泻病毒研究进展 | 第14-29页 |
| 1.1 PEDV的病原学特征 | 第14-19页 |
| 1.1.1 PEDV的结构蛋白 | 第15-18页 |
| 1.1.2 PEDV的非结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2 PEDV的流行病学 | 第19-22页 |
| 1.3 PEDV的致病机理 | 第22-24页 |
| 1.4 PEDV的主要诊断方法 | 第24-27页 |
| 1.4.1 RT-PCR | 第24页 |
| 1.4.2 ELISA | 第24-25页 |
| 1.4.3 胶体金试纸检测技术 | 第25-27页 |
| 1.5 PEDV的防治 | 第27-29页 |
| 1.5.1 PEDV疫苗研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5.2 PEDV的治疗 | 第28-29页 |
| 第二章 河南省猪流行性腹泻病毒的遗传进化分析 | 第29-59页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-37页 |
| 2.1.1 河南省PEDV遗传进化分析材料与方法 | 第29-34页 |
| 2.1.2 PEDV流行毒株（CH/HNQX-3/14）的致病性与基因组序列分析的材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.2 结果 | 第37-53页 |
| 2.2.1 PEDV病原学检测结果 | 第37-39页 |
| 2.2.2.基于 0RF3基因和部分S基因的PEDV遗传进化分析 | 第39-45页 |
| 2.2.3 PEDV流行毒株（CH/HNQX-3/14）的致病性及基因组序列分析 | 第45-53页 |
| 2.3 讨论 | 第53-57页 |
| 2.3.1 关于PEDV与当前仔猪腹泻流行的关系 | 第53-54页 |
| 2.3.2 ORF3作为开展PEDV分子流行病学的重要工具 | 第54-55页 |
| 2.3.3 关于S基因变异与PEDV流行的关系 | 第55页 |
| 2.3.4 关于PEDV的致病性研究 | 第55-56页 |
| 2.3.5 关于重组毒株CH/HNQX-3/14 的分子进化 | 第56-57页 |
| 2.4 小结 | 第57-59页 |
| 第三章 检测PEDV Ig A抗体ELISA方法的建立 | 第59-78页 |
| 3.1 材料 | 第59-60页 |
| 3.1.1 血清 | 第59页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 3.2 方法 | 第60-63页 |
| 3.2.1 PEDV p S1基因的克隆 | 第60-61页 |
| 3.2.2 PEDV p S1基因在大肠杆菌中的表达 | 第61-63页 |
| 3.2.3 基于重组p S1蛋白检测PEDV Ig A间接ELISA方法的建立 | 第63页 |
| 3.3 结果 | 第63-75页 |
| 3.3.1 p S1基因的RT-PCR扩增结果 | 第63-64页 |
| 3.3.2 重组表达质粒p ET30a（+）-p S1双酶切鉴定 | 第64页 |
| 3.3.3 重组质粒的测序鉴定 | 第64-65页 |
| 3.3.4 重组p S1蛋白的诱导表达 | 第65-68页 |
| 3.3.5 基于重组p S1蛋白的PEDV Ig A间接ELISA方法的建立 | 第68-75页 |
| 3.4 讨论 | 第75-76页 |
| 3.4.1 关于p S1蛋白表达系统的选择 | 第75页 |
| 3.4.2 关于p S1蛋白的表达与纯化 | 第75-76页 |
| 3.4.3 关于ELISA检测方法的建立 | 第76页 |
| 3.5 小结 | 第76-78页 |
| 第四章 检测PEDV Ig G抗体免疫层析试纸的研制 | 第78-99页 |
| 4.1 材料 | 第78-80页 |
| 4.1.1 载体、质粒和菌株 | 第78页 |
| 4.1.2 血清 | 第78页 |
| 4.1.3 主要试剂及耗材 | 第78-79页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第79页 |
| 4.1.5 主要溶液的配制 | 第79-80页 |
| 4.2 方法 | 第80-86页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第80页 |
| 4.2.2 PCR扩增 | 第80-81页 |
| 4.2.3 DNA及载体的双酶切、连接和转化 | 第81页 |
| 4.2.4 阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第81页 |
| 4.2.5 PEDV N基因在大肠杆菌中的表达 | 第81页 |
| 4.2.6 表达产物的纯化 | 第81-82页 |
| 4.2.7 纯化蛋白的免疫印记（Western-blot）鉴定 | 第82页 |
| 4.2.8 金标抗原的制备 | 第82-83页 |
| 4.2.9 结合垫的制备 | 第83页 |
| 4.2.10 硝酸纤维膜的制备 | 第83-84页 |
| 4.2.11 样品垫的处理 | 第84页 |
| 4.2.12 吸水垫制备 | 第84页 |
| 4.2.13 试纸的组装 | 第84页 |
| 4.2.14 PEDV N蛋白试纸原理及检测方法 | 第84-85页 |
| 4.2.15 试纸系统条件优化 | 第85-86页 |
| 4.2.16 试纸性能评价 | 第86页 |
| 4.3 结果 | 第86-94页 |
| 4.3.1 N基因的PCR扩增结果 | 第86-87页 |
| 4.3.2 重组质粒的构建与鉴定结果 | 第87页 |
| 4.3.3 重组质粒的诱导表达 | 第87-88页 |
| 4.3.4 N蛋白的纯化结果 | 第88-89页 |
| 4.3.5 纯化后的N蛋白鉴定 | 第89-90页 |
| 4.3.6 胶体金颗粒的质量鉴定 | 第90-91页 |
| 4.3.7 标金前蛋白的处理 | 第91页 |
| 4.3.8 蛋白最佳标金量的确定 | 第91-92页 |
| 4.3.9 试纸的组装 | 第92页 |
| 4.3.10 试纸系统条件优化 | 第92页 |
| 4.3.11 试纸性能评价 | 第92-94页 |
| 4.4 讨论 | 第94-98页 |
| 4.4.1 关于N蛋白的功能与表达 | 第94-95页 |
| 4.4.2 关于N蛋白的纯化 | 第95-96页 |
| 4.4.3 关于金标试纸技术 | 第96-98页 |
| 4.4.4 关于胶体金免疫层析试纸的应用 | 第98页 |
| 4.5 小结 | 第98-99页 |
| 全文总结 | 第99-101页 |
| 本论文创新点和进一步研究课题 | 第101-102页 |
| 创新点 | 第101页 |
| 进一步研究课题 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 缩略词 | 第112-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 作者简介 | 第116页 |
