| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-42页 |
| 第一章 动物乳腺生物反应器研究概况 | 第15-35页 |
| 1.1 动物生物反应器概况 | 第15-18页 |
| 1.1.1 血液生物反应器 | 第16-17页 |
| 1.1.2 膀胱生物反应器 | 第17页 |
| 1.1.3 家禽输卵管生物反应器 | 第17页 |
| 1.1.4 乳腺生物反应器 | 第17-18页 |
| 1.2 乳腺生物反应器的制备 | 第18-33页 |
| 1.2.1 动物的选择 | 第18-19页 |
| 1.2.2 体细胞核移植技术 | 第19-20页 |
| 1.2.3 随机整合转基因技术 | 第20-23页 |
| 1.2.4 基因打靶技术 | 第23-33页 |
| 1.3 总结与展望 | 第33-35页 |
| 第二章 基因工程亚单位疫苗研究进展 | 第35-42页 |
| 2.1. 基因工程亚单位抗原的生产 | 第35-38页 |
| 2.1.1 细菌表达系统 | 第35-36页 |
| 2.1.2 酵母表达系统 | 第36页 |
| 2.1.3 昆虫表达系统 | 第36-37页 |
| 2.1.4 植物表达系统 | 第37页 |
| 2.1.5 哺乳类细胞表达系统 | 第37页 |
| 2.1.6 动物表达系统（乳腺生物反应器） | 第37-38页 |
| 2.2 兽用基因工程亚单位疫苗的研制与应用 | 第38-41页 |
| 2.2.1 禽流感病毒（H5N1亚型） | 第38-39页 |
| 2.2.2 猪瘟 | 第39-40页 |
| 2.2.3 猪繁殖与呼吸综合征 | 第40-41页 |
| 2.2.4 口蹄疫 | 第41页 |
| 2.3 总结与展望 | 第41-42页 |
| 试验研究 | 第42-104页 |
| 第三章 TALENs表达载体的构建 | 第42-54页 |
| 3.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 血液样本 | 第42页 |
| 3.1.2 菌株、质粒和细胞株 | 第42页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.4 测试化验加工 | 第43页 |
| 3.2 试验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 TALENs表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 TALENs生物活性检测 | 第44-46页 |
| 3.2.3 点突变法制备TALE切口酶表达载体 | 第46-47页 |
| 3.3 结果 | 第47-52页 |
| 3.3.1 靶向BLG exon2 TALENs表达载体的构建及其生物活性验证 | 第47-51页 |
| 3.3.2 TALEs切口酶的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 EGFP在山羊BLG基因座不同插入位点的表达水平比较 | 第54-76页 |
| 4.1 试验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 动物组织 | 第54页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第54页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.4 测试化验加工 | 第55页 |
| 4.2 试验方法 | 第55-64页 |
| 4.2.1 针对BLG基因Exon1和Exon2置换型打靶载体的构建 | 第55-59页 |
| 4.2.2 山羊乳腺上皮细胞（GMECs）的培养与鉴定 | 第59-61页 |
| 4.2.3 基因打靶山羊乳腺上皮细胞的建立 | 第61-63页 |
| 4.2.4 EGFP在GMECs中的表达检测 | 第63-64页 |
| 4.3 结果 | 第64-74页 |
| 4.3.1 针对BLG基因exon1和exon2置换型基因打靶载体的构建 | 第64-69页 |
| 4.3.2 GMECs的培养与鉴定 | 第69-70页 |
| 4.3.3 EGFP在山羊BLG基因座不同插入位点的表达水平比较 | 第70-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-75页 |
| 4.5 小结 | 第75-76页 |
| 第五章 基因打靶体细胞的筛选鉴定及转基因山羊的制备 | 第76-95页 |
| 5.1 试验材料 | 第76-77页 |
| 5.1.1 试验动物材料和动物受体 | 第76页 |
| 5.1.2 菌株和质粒 | 第76-77页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 5.1.4 测试化验加工 | 第77页 |
| 5.2 试验方法 | 第77-83页 |
| 5.2.1 基因打靶载体的构建 | 第77-78页 |
| 5.2.2 西农莎能奶山羊胎儿成纤维细胞的培养与性别鉴定 | 第78-79页 |
| 5.2.3 转染并筛选基因打靶山羊胎儿成纤维细胞 | 第79-81页 |
| 5.2.4 体细胞核移植及胚胎移植 | 第81-82页 |
| 5.2.5 克隆山羊的鉴定 | 第82-83页 |
| 5.3 结果 | 第83-93页 |
| 5.3.1 基因打靶载体的构建 | 第83-85页 |
| 5.3.2 山羊胎儿成纤维细胞培养培养与性别鉴定 | 第85-86页 |
| 5.3.3 基因打靶山羊胎儿成纤维细胞的建立 | 第86-90页 |
| 5.3.4 体细胞核移植生产基因打靶山羊 | 第90-93页 |
| 5.4 讨论 | 第93-94页 |
| 5.5 小结 | 第94-95页 |
| 第六章 转基因山羊乳中rVP1和rE2的表达及免疫原性检测 | 第95-104页 |
| 6.1 试验材料 | 第95-96页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第95页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第95-96页 |
| 6.2 试验方法 | 第96-99页 |
| 6.2.1 激素诱导基因打靶奶山羊泌乳 | 第96页 |
| 6.2.2 基因打靶奶山羊乳中E2和VP1蛋白的检测 | 第96-97页 |
| 6.2.3 山羊乳中外源蛋白的纯化 | 第97页 |
| 6.2.4 重组VP1蛋白和重组E2蛋白免疫功能性检验 | 第97-99页 |
| 6.3 结果 | 第99-102页 |
| 6.3.1 基因打靶山羊乳中重组蛋白的检测 | 第99-100页 |
| 6.3.2 乳清中重组蛋白的纯化及检测 | 第100-101页 |
| 6.3.3 rVP1和rE2的免疫功能检验 | 第101-102页 |
| 6.4 讨论 | 第102-103页 |
| 6.5 小结 | 第103-104页 |
| 全文结论 | 第104-105页 |
| 创新之处与进一步研究的课题 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-123页 |
| 附录 主要仪器 | 第123-125页 |
| 缩略词 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 作者简介 | 第127页 |
