| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 百合及百合病毒病概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 百合的特性、经济价值及生产现状 | 第12-13页 |
| 1.1.2 百合病毒危害 | 第13页 |
| 1.1.3 百合病毒防治 | 第13-14页 |
| 1.1.4 百合病毒检测 | 第14-16页 |
| 1.2 LMoV研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.1 LMoV病原学和病害流行学 | 第17页 |
| 1.2.2 LMoV分子生物学介绍 | 第17页 |
| 1.3 植物病毒侵染对寄主的影响 | 第17-19页 |
| 1.3.1 植物病毒侵染对寄主光合作用的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.2 植物病毒侵染对寄主细胞病理学的影响 | 第18页 |
| 1.3.3 植物病毒侵染对寄主叶绿体结构的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.4 植物病毒CP与寄主蛋白互作 | 第19页 |
| 1.3.5 植物病毒CP与花叶症状的相关性 | 第19页 |
| 1.4 蛋白原核表达及抗血清制备 | 第19-21页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统 | 第19-20页 |
| 1.4.2 His融合表达系统 | 第20页 |
| 1.4.3 病毒编码蛋白作为抗原制备抗血清 | 第20-21页 |
| 1.5 研究目的、意义及内容 | 第21-22页 |
| 1.5.1 研究目的及意义 | 第21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 2 LMoV CP的克隆 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 材料和试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 常用溶液 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 感病百合总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 LMoV CP的获得 | 第24-25页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.4 重组质粒pMD~(TM)18-CP的转化 | 第26页 |
| 2.2.5 重组质粒pMD~(TM)18-CP的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 重组质粒pMD~(TM)18-CP的验证 | 第27页 |
| 2.2.7 序列分析 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 百合叶片总RNA分析 | 第27-28页 |
| 2.3.2 LMoV CP的获得 | 第28页 |
| 2.3.3 重组质粒pMD~(TM)18-CP的PCR验证 | 第28-29页 |
| 2.3.4 重组质粒pMD~(TM)18-CP的双酶切验证 | 第29-30页 |
| 2.3.5 测序结果分析 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 3 LMoV CP原核表达及条件优化 | 第32-43页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第32-34页 |
| 3.1.1 材料和试剂 | 第32页 |
| 3.1.2 常用溶液 | 第32-33页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 3.2.2 重组质粒pET28a-CP的转化 | 第34页 |
| 3.2.3 重组质粒pET28a-CP的获得和验证 | 第34页 |
| 3.2.4 pET28a-CP的诱导表达 | 第34页 |
| 3.2.5 蛋白样品制备 | 第34-35页 |
| 3.2.6 蛋白样品的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 3.2.7 pET28a-CP诱导表达条件优化 | 第36页 |
| 3.2.8 质谱检测 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-41页 |
| 3.3.1 重组质粒pET28a-CP的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.2 重组质粒pET28a-CP的PCR验证 | 第37页 |
| 3.3.3 重组质粒pET28a-CP的双酶切验证 | 第37-38页 |
| 3.3.4 pET28a-CP的诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.3.5 pET28a-CP诱导表达条件的优化 | 第39-41页 |
| 3.3.6 质谱分析 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 小结 | 第42-43页 |
| 4 LMoV CP抗血清制备及其应用 | 第43-54页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第43-45页 |
| 4.1.1 材料和试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 常用溶液 | 第43-45页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 融合蛋白His-CP的纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.2 纯化融合蛋白His-CP的SDS-PAGE分析 | 第46页 |
| 4.2.3 纯化融合蛋白His-CP的浓度测定 | 第46-47页 |
| 4.2.4 纯化融合蛋白His-CP免疫小鼠 | 第47页 |
| 4.2.5 间接ELISA法检测抗血清效价 | 第47-48页 |
| 4.2.6 Western blot检测抗血清特异性 | 第48-49页 |
| 4.2.7 百合样品RT-PCR和间接ELISA检测 | 第49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 4.3.1 纯化融合蛋白His-CP的SDS-PAGE分析 | 第49页 |
| 4.3.2 纯化融合蛋白His-CP浓度的测定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 抗血清的效价分析 | 第50-51页 |
| 4.3.4 抗血清的特异性分析 | 第51页 |
| 4.3.5 百合样品RT-PCR和间接ELISA分析 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 5 LMoV CP在百合叶绿体中的检测 | 第54-63页 |
| 5.1 实验材料和仪器 | 第54-55页 |
| 5.1.1 材料和试剂 | 第54页 |
| 5.1.2 常用溶液 | 第54页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第54-55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 5.2.1 叶绿体超薄切片 | 第55-56页 |
| 5.2.2 百合完整游离叶绿体的制备 | 第56-57页 |
| 5.2.3 叶绿体总蛋白的抽提 | 第57页 |
| 5.2.4 LMoV CP叶绿体离体跨膜 | 第57-58页 |
| 5.3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 5.3.1 LMoV侵染对叶绿体超微结构的影响 | 第58页 |
| 5.3.2 LMoV CP的免疫金标记定位 | 第58-59页 |
| 5.3.3 SDS-PAGE和Western blot分析 | 第59-60页 |
| 5.3.4 LMoV CP蛋白叶绿体离体跨膜运输 | 第60-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61-62页 |
| 5.5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录A 病毒序列 | 第71-72页 |
| 附录B 论文所用Marker和质粒图谱 | 第72-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
