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蓝舌病病毒VP7蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的筛选

摘要第6-7页
Abstract第7页
英文缩略表第11-12页
第一章 引言第12-21页
    1.1 蓝舌病概述第12-18页
        1.1.1 蓝舌病病原学特点第12-13页
        1.1.2 蓝舌病的流行病学特点第13页
        1.1.3 蓝舌病病毒基因组编码蛋白及其生物学功能第13-15页
        1.1.4 蓝舌病病毒的生命周期第15-17页
        1.1.5 蓝舌病病毒的致病机理第17-18页
        1.1.6 蓝舌病的防治第18页
    1.2 研究蛋白相互作用的主要方法和技术第18-19页
        1.2.1 酵母双杂交技术第18-19页
        1.2.2 GST pull down第19页
        1.2.3 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)第19页
        1.2.4 噬菌体展示(Phage Display Techniques, PDT)第19页
    1.3 研究目的和意义第19-21页
第二章 蓝舌病病毒VP7蛋白诱饵质粒PGBKT7-VP7的构建与鉴定第21-30页
    2.1 实验材料第21-22页
        2.1.1 菌株、细胞和质粒第21页
        2.1.2 主要仪器第21页
        2.1.3 主要试剂、试剂盒和耗材第21-22页
        2.1.4 主要培养基和试剂的配置第22页
    2.2 实验方法第22-26页
        2.2.1 引物设计第22-23页
        2.2.2 VP7诱饵质粒的构建第23-25页
        2.2.3 诱饵质粒的自激活和毒性检测第25-26页
    2.3 实验结果第26-28页
        2.3.1 VP7诱饵质粒的构建第26-27页
        2.3.2 诱饵质粒的自激活和毒性检测第27-28页
    2.4 小结和讨论第28-30页
第三章 LT细胞酵母双杂交CDNA文库的构建第30-41页
    3.1 实验材料第30页
        3.1.1 菌株、细胞和质粒第30页
        3.1.2 主要仪器第30页
        3.1.3 主要试剂、试剂盒和耗材第30页
        3.1.4 主要培养基和试剂的配置第30页
    3.2 实验方法第30-34页
        3.2.1 LT细胞总RNA的提取第30-31页
        3.2.2 第一链cDNA的合成第31-32页
        3.2.3 长距离PCR(LD-PCR)扩增ds cDNA第32页
        3.2.4 dscDNA的纯化第32-33页
        3.2.5 Y187酵母感受态的制备第33页
        3.2.6 转化入酵母菌Y187第33-34页
        3.2.7 文库收获第34页
        3.2.8 文库质量检测第34页
    3.3 实验结果第34-38页
        3.3.1 细胞总RNA的提取第34-35页
        3.3.2 LD-PCR扩增ds-cDNA第35页
        3.3.3 ds-cDNA的纯化第35-36页
        3.3.4 文库滴度的计算第36页
        3.3.5 文库的多态性鉴定第36-38页
    3.4 小结和讨论第38-41页
第四章 酵母双杂交筛选与BTV VP7相互作用的宿主细胞蛋白第41-50页
    4.1 实验材料第41页
        4.1.1 菌株、细胞和质粒第41页
        4.1.2 主要仪器第41页
        4.1.3 主要试剂、试剂盒和耗材第41页
        4.1.4 主要培养基和试剂的配置第41页
    4.2 实验方法第41-44页
        4.2.1 诱饵菌株与文库菌的杂交筛选第41-42页
        4.2.2 酵母质粒提取第42-43页
        4.2.3 酵母质粒转化入大肠杆菌第43页
        4.2.4 阳性克隆的筛选与回转验证第43-44页
    4.3 实验结果第44-47页
        4.3.1 杂交效率第44页
        4.3.2 回转验证结果第44-47页
    4.4 小结和讨论第47-50页
第五章 全文结论第50-51页
参考文献第51-59页
致谢第59-60页
作者简介第60页

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