| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| ·概述 | 第17-20页 |
| ·普鲁兰酶的研究进展 | 第20-27页 |
| ·普鲁兰酶的结构与催化机理 | 第20-22页 |
| ·酶学性质 | 第22-23页 |
| ·普鲁兰酶的产生菌种 | 第23页 |
| ·普鲁兰酶的基因工程研究 | 第23-24页 |
| ·普鲁兰酶的定位和分泌 | 第24-25页 |
| ·普鲁兰酶的应用 | 第25-26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第27页 |
| ·大肠杆菌高密度发酵研究进展 | 第27-32页 |
| ·细胞密度 | 第28页 |
| ·影响大肠杆菌高密度生长的因素 | 第28-30页 |
| ·高密度发酵技术 | 第30-31页 |
| ·分子生物学提高大肠杆菌高密度生长的研究 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的意义 | 第32-33页 |
| 第二章 普鲁兰酶产生菌的分离鉴定及发酵条件的优化 | 第33-47页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·工具酶和试剂 | 第33页 |
| ·引物合成和测序 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·培养基和试剂 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·菌体富集 | 第34页 |
| ·平板筛选 | 第34-35页 |
| ·普鲁兰酶活力测定 | 第35页 |
| ·菌株生理生化特征与形态学鉴定 | 第35页 |
| ·16S rDNA 鉴定 | 第35-37页 |
| ·发酵产酶条件的优化 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-44页 |
| ·菌株初筛 | 第38页 |
| ·普鲁兰酶活力的测定 | 第38-39页 |
| ·菌株的复筛 | 第39页 |
| ·菌株鉴定 | 第39-40页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第40-41页 |
| ·发酵产酶条件的优化 | 第41-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·本章结论 | 第45-47页 |
| 第三章 普鲁兰酶基因的克隆 | 第47-61页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·菌种和载体 | 第47页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第47页 |
| ·试剂盒 | 第47页 |
| ·培养基和溶液配制 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·微小杆菌基因组 DNA 的提取 | 第47页 |
| ·普鲁兰酶部分基因的克隆 | 第47-49页 |
| ·DNA 片段的回收、连接、转化及测序 | 第49页 |
| ·普鲁兰酶全基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·简并引物的获得 | 第50-51页 |
| ·普鲁兰酶部分编码基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·普鲁兰酶全基因的克隆及序列分析 | 第52-56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| ·用 CODEHOP 设计简并引物 | 第56-57页 |
| ·普鲁兰酶基因的克隆 | 第57页 |
| ·普鲁兰酶的序列分析 | 第57-60页 |
| ·本章结论 | 第60-61页 |
| 第四章 普鲁兰酶基因的改造和表达 | 第61-78页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌种和载体 | 第61页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第61页 |
| ·实验仪器 | 第61页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第61-63页 |
| ·实验方法 | 第63-67页 |
| ·表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导表达 | 第65页 |
| ·重组普鲁兰酶的 SDS-PAGE 分析 | 第65-66页 |
| ·重组大肠杆菌酶液的制备 | 第66页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化 | 第66页 |
| ·重组普鲁兰酶酶学性质分析 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-75页 |
| ·重组普鲁兰酶表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·重组大肠杆菌在 LB 培养基中的诱导表达 | 第68-71页 |
| ·重组 ExPulA1R 在 LB 培养基中的分泌表达 | 第71页 |
| ·重组 ExPulA1R 在乳糖自动诱导培养基中表达 | 第71-72页 |
| ·重组 ExPulA1R 的纯化 | 第72-73页 |
| ·重组 ExPulA1R 酶学性质分析 | 第73-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·普鲁兰酶的表达 | 第75-76页 |
| ·普鲁兰酶酶学性质的研究 | 第76页 |
| ·乳糖自动诱导系统 | 第76-77页 |
| ·本章结论 | 第77-78页 |
| 第五章 重组大肠杆菌产普鲁兰酶的高密度发酵工艺研究 | 第78-87页 |
| ·实验材料 | 第78-79页 |
| ·培养基 | 第78页 |
| ·菌株和质粒 | 第78页 |
| ·仪器设备 | 第78-79页 |
| ·实验方法 | 第79-81页 |
| ·摇瓶试验 | 第79页 |
| ·高密度发酵 | 第79-80页 |
| ·分析方法 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-84页 |
| ·重组大肠杆菌的摇瓶试验 | 第81-82页 |
| ·重组大肠杆菌的高密度发酵 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| ·本章结论 | 第86-87页 |
| 第六章 全文结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
