| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-11页 |
| 1.1 论文的研究背景 | 第8页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第8-10页 |
| 1.3 课题的来源及主要研究内容 | 第10-11页 |
| 第2章 材料与方法 | 第11-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第11-18页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第11页 |
| 2.1.2 菌株 | 第11页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第11-15页 |
| 2.1.4 工具酶及DNA分子量标准 | 第15页 |
| 2.1.5 试剂盒 | 第15页 |
| 2.1.6 培养基 | 第15页 |
| 2.1.7 主要化学试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.8 主仪要器及设备 | 第16-17页 |
| 2.1.9 DNA序列分析软件 | 第17页 |
| 2.1.10 引物 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-32页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第18-22页 |
| 2.2.2 重组蛋白质表达 | 第22-23页 |
| 2.2.3 可溶解形式融合蛋白的纯化 | 第23页 |
| 2.2.4 Western Blotting分析 | 第23-24页 |
| 2.2.5 GST Pull-Down实验 | 第24页 |
| 2.2.6 测定与扩增双杂cDNA文库 | 第24-25页 |
| 2.2.7 酵母转化 | 第25-27页 |
| 2.2.8 检测β-半乳糖苷酶活性 | 第27页 |
| 2.2.9 提取与转化酵母质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.10 酵母双杂实验中常用试剂的配制 | 第28-30页 |
| 2.2.11 细胞的培养 | 第30-31页 |
| 2.2.12 真核细胞质粒转染脂质体介导法 | 第31页 |
| 2.2.13 细胞荧光 | 第31-32页 |
| 第3章 实验结果 | 第32-52页 |
| 3.1 14-3-3ε的生物信息学分析及GST-14-3-3ε融合蛋白质的表达 | 第32-37页 |
| 3.1.1 14-3-3ε的生物信息学分析 | 第32-34页 |
| 3.1.2 GST-14-3-3ε融合蛋白质的表达 | 第34-36页 |
| 3.1.3 部分小结 | 第36-37页 |
| 3.2 鼠的14-3-3ε相互作用蛋白质的酵母双杂交筛选 | 第37-40页 |
| 3.2.1 筛选人胎脑cDNA文库 | 第37-39页 |
| 3.2.2 部分小结 | 第39-40页 |
| 3.3 酵母双杂实验确定14-3-3ε和KICβ相互作用的区域 | 第40-48页 |
| 3.3.1 KICβ的生物信息学分析 | 第40-45页 |
| 3.3.2 KICβ基因分段构建到AD载体 | 第45-47页 |
| 3.3.3 KICβ的三部分的自激活验证 | 第47页 |
| 3.3.4 酵母双杂交验证相互作用 | 第47-48页 |
| 3.3.5 部分小结 | 第48页 |
| 3.4 14-3-3ε和KICβ共定位 | 第48-50页 |
| 3.4.1 构建pEGFP-N1-KICβ以及pDsRed-14-3-3ε真核表达载体 | 第48-49页 |
| 3.4.2 在真核细胞中表达GFP-KICβ重组质粒 | 第49-50页 |
| 3.4.3 KICβ和14-3-3ε在细胞中的共定位 | 第50页 |
| 3.4.4 部分小结 | 第50页 |
| 3.5 Pull-down验证蛋白体外相互作用 | 第50-52页 |
| 3.5.1 GST Pull-down分析 | 第50-51页 |
| 3.5.2 部分小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
