| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-24页 |
| 0.1 概述 | 第12-14页 |
| 0.2 抗菌肽的结构特征 | 第14-15页 |
| 0.2.1 α-螺旋类抗菌肽 | 第14页 |
| 0.2.2 开放性螺旋结构类抗菌肽 | 第14-15页 |
| 0.2.3 环链结构类抗菌肽 | 第15页 |
| 0.2.4 β-折叠型抗菌肽 | 第15页 |
| 0.3 抗菌肽的抗菌机理 | 第15-16页 |
| 0.4 两栖类抗菌肽的功能 | 第16-19页 |
| 0.4.1 抗细菌活性 | 第17页 |
| 0.4.2 抗肿瘤活性 | 第17页 |
| 0.4.3 抗病毒活性 | 第17-18页 |
| 0.4.4 抗原虫活性 | 第18页 |
| 0.4.5 抗精子作用 | 第18页 |
| 0.4.6 胚胎毒性 | 第18-19页 |
| 0.4.7 细胞调亡 | 第19页 |
| 0.4.8 其他活性 | 第19页 |
| 0.5 抗菌肽的应用现状及前景 | 第19-21页 |
| 0.5.1 抗菌肽的药用前景 | 第19-20页 |
| 0.5.2 抗菌肽在农业领域的应用前景 | 第20页 |
| 0.5.3 抗菌肽在畜牧水产养殖业领域的应用 | 第20-21页 |
| 0.5.4 抗菌肽在食品领域的应用 | 第21页 |
| 0.6 抗菌肽原核表达优势 | 第21-22页 |
| 0.7 实验目的及意义 | 第22-24页 |
| 第1章 抗菌肽Dybowskin-2CDYa原核表达载体构建 | 第24-38页 |
| 1.1 引言 | 第24-25页 |
| 1.2 材料 | 第25-27页 |
| 1.2.1 菌种和载体 | 第25页 |
| 1.2.2 工具酶与生化试剂 | 第25页 |
| 1.2.3 仪器与设备 | 第25-26页 |
| 1.2.4 溶液与培养基的配制 | 第26-27页 |
| 1.3 方法 | 第27-34页 |
| 1.3.1 实验策略 | 第27页 |
| 1.3.2 引物设计 | 第27-28页 |
| 1.3.3 SOE-PCR法扩增Dybowskin-2CDYa的成熟肽序列 | 第28-30页 |
| 1.3.4 表达质粒的构建 | 第30-34页 |
| 1.3.5 阳性重组质粒的测序与分析 | 第34页 |
| 1.4 结果 | 第34-37页 |
| 1.4.1 Dybowskin-2CDYa成熟肽基因序列的获得 | 第34-35页 |
| 1.4.2 粘性末端的制备 | 第35页 |
| 1.4.3 阳性重组质粒的PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 1.4.4 阳性重组质粒的测序 | 第36-37页 |
| 1.5 讨论 | 第37-38页 |
| 第2章 抗菌肽Dybowskin-2CDYa在大肠杆菌中的表达纯化鉴定及活性检测 | 第38-56页 |
| 2.1 引言 | 第38页 |
| 2.2 材料 | 第38-41页 |
| 2.2.1 实验菌种及载体 | 第38-39页 |
| 2.2.2 生化试剂及抗体 | 第39页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 2.2.4 溶液与培养基的配制 | 第39-41页 |
| 2.3 方法 | 第41-46页 |
| 2.3.1 重组质粒制备 | 第41页 |
| 2.3.2 转化大肠杆菌宿主BL21 (DE3) plsS | 第41页 |
| 2.3.3 阳性重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.4 阳性重组子的摇瓶诱导表达 | 第42页 |
| 2.3.5 表达产物蛋白水平检测 | 第42-43页 |
| 2.3.6 表达产物Wseternblot检测 | 第43-44页 |
| 2.3.7 重组菌的大量培养及重组蛋白的纯化 | 第44页 |
| 2.3.8 重组蛋白的抑菌活性 | 第44-45页 |
| 2.3.9 重组蛋白抑菌谱 | 第45-46页 |
| 2.3.10 重组蛋白溶血活性 | 第46页 |
| 2.4 结果 | 第46-53页 |
| 2.4.1 重组质粒制备 | 第46页 |
| 2.4.2 阳性重组子菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4.3 表达产物蛋白水平检测 | 第47-48页 |
| 2.4.4 表达产物Westernblot检测 | 第48-49页 |
| 2.4.5 重组蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 2.4.6 重组蛋白抑菌活性 | 第50-51页 |
| 2.4.7 重组蛋白抑菌谱 | 第51-52页 |
| 2.4.8 重组蛋白溶血活性 | 第52-53页 |
| 2.5 讨论 | 第53-56页 |
| 第3章 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第62页 |
