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一种新的细菌吡喃糖氧化酶的表达及其催化性质研究

摘要第5-6页
Abstract第6-7页
第1章 绪论第11-21页
    1.1 水稻秸秆资源现状及其降解研究进展第11-12页
        1.1.1 水稻秸秆资源利用现状第11页
        1.1.2 水稻秸秆生物降解研究进展第11-12页
    1.2 木质素的生物降解第12-15页
        1.2.1 木质素降解酶类对木质素的降解第13-14页
        1.2.2 非酶途径对木质素的降解第14-15页
    1.3 吡喃糖氧化酶第15-19页
        1.3.1 吡喃糖氧化酶的分子特征第15-16页
        1.3.2 吡喃糖氧化酶的催化特性第16页
        1.3.3 真菌来源的吡喃糖氧化酶第16-17页
        1.3.4 细菌来源的吡喃糖氧化酶第17页
        1.3.5 吡喃糖氧化酶与漆酶的互作关系第17-18页
        1.3.6 吡喃糖氧化酶的应用第18-19页
    1.4 论文选题背景、研究内容及思路第19-21页
        1.4.1 论文选题背景第19-20页
        1.4.2 论文研究思路第20-21页
第2章 Pantoea ananatis Sd-1中吡喃糖氧化酶基因的克隆、原核表达与蛋白纯化第21-47页
    2.1 前言第21页
    2.2 实验材料、仪器与方法第21-38页
        2.2.1 实验菌种及质粒载体第21-23页
        2.2.2 实验试剂第23-24页
        2.2.3 实验培养基及试剂配置第24-26页
        2.2.4 主要实验仪器和设备第26页
        2.2.5 P.ananatis Sd-1中GMC家族氧化还原酶基因的生物信息学分析第26页
        2.2.6 目的基因的克隆与表达载体构建第26-35页
        2.2.7 目的基因的表达与蛋白纯化第35-36页
        2.2.8 SDS-PAGE电泳检测目的蛋白第36-37页
        2.2.9 酶活检测第37-38页
        2.2.10 蛋白浓度测定第38页
    2.3 实验结果及其分析与讨论第38-46页
        2.3.1 GMC家族氧化还原酶基因的生物信息学初步分析第38-41页
        2.3.2 P2O基因的克隆与表达载体构建第41-42页
        2.3.3 P2O蛋白的表达与吡喃糖氧化酶活性测定活性测定第42-43页
        2.3.4 pCold TF-P2O诱导表达目的蛋白的纯化第43-45页
        2.3.5 pGEX-4T-1-P2O诱导表达目的蛋白的纯化第45-46页
    2.4 本章小结第46-47页
第3章 Pantoea ananatis Sd-1中吡喃糖氧化酶的催化性质研究第47-56页
    3.1 前言第47页
    3.2 实验材料、仪器与方法第47-51页
        3.2.1 主要实验仪器和设备第47页
        3.2.2 实验试剂第47页
        3.2.3 实验试剂配置第47-48页
        3.2.4 Native-PAGE检测目的蛋白第48页
        3.2.5 Western-blot检测目的蛋白第48-49页
        3.2.6 吡喃糖氧化酶的生化性质研究第49-50页
        3.2.7 吡喃糖氧化酶对漆酶降解木质素影响的研究第50-51页
    3.3 实验结果及其分析与讨论第51-55页
        3.3.1 Native-PAGE电泳与Western-blot检测目的蛋白P20第51-52页
        3.3.2 温度、pH对目的蛋白P20的影响第52-53页
        3.3.3 目的蛋白P2O对不同糖类底物的作用第53-54页
        3.3.4 细菌中吡喃糖氧化酶对漆酶作用的影响第54-55页
    3.4 本章小结第55-56页
第4章 Pantoea ananatis Sd-1中吡喃糖氧化酶基因的同源过表达第56-68页
    4.1 前言第56页
    4.2 实验材料、仪器与方法第56-62页
        4.2.1 实验菌种第56页
        4.2.2 主要实验仪器和设备第56页
        4.2.3 实验试剂第56-57页
        4.2.4 实验试剂及培养基配置第57页
        4.2.5 过表达载体的构建第57-60页
        4.2.6 过表达载体在P.ananatis Sd-1中的表达及检测第60-61页
        4.2.7 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株生长状况的影响第61-62页
        4.2.8 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株秸秆降解率的影响第62页
        4.2.9 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株产过氧化氢量的影响第62页
        4.2.10 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株木质素脱色率的影响第62页
    4.3 实验结果及其分析与讨论第62-67页
        4.3.1 过表达启动子的选择第62-63页
        4.3.2 吡喃糖氧化酶基因过表达载体的构建第63-64页
        4.3.3 吡喃糖氧化酶基因过表达载体蛋白表达的验证第64-65页
        4.3.4 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株生长状况的影响第65-66页
        4.3.5 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株秸秆降解率及产过氧化氢量的影响第66-67页
        4.3.6 吡喃糖氧化酶基因过表达对菌株木质素脱色率的影响第67页
    4.4 本章小结第67-68页
结论第68-69页
参考文献第69-76页
附录A 攻读学位期间发表的论文和专利第76-77页
附录B 碱基序列第77-79页
致谢第79页

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