| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 文献综述 | 第9-26页 |
| 1.1 CSFV病毒粒子的结构及理化性质 | 第10-12页 |
| 1.2 CSFV基因组编码蛋白及其功能 | 第12-15页 |
| 1.2.1 C蛋白 | 第12页 |
| 1.2.2 E0蛋白 | 第12-13页 |
| 1.2.3 E1蛋白 | 第13页 |
| 1.2.4 E2蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2.5 非结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3 CSFV的致病机理 | 第15-16页 |
| 1.4 CSFV的诊断技术与疫苗研制 | 第16-18页 |
| 1.4.1 CSFV的实验室诊断技术 | 第16-17页 |
| 1.4.2 CSFV的疫苗研制 | 第17-18页 |
| 1.5 CSF的防治与控制 | 第18-19页 |
| 1.6 巴斯德毕赤酵母表达系统的特点及应用前景 | 第19-22页 |
| 1.7 哺乳动物细胞表达系统的特点及应用前景 | 第22-24页 |
| 1.8 本课题的研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 猪瘟病毒E0蛋白在毕赤酵母表达系统中的表达 | 第26-54页 |
| 2.1 材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 菌种、载体和血清 | 第26页 |
| 2.1.2 仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第27-29页 |
| 2.2 试验所需培养基和溶液的配置 | 第29-32页 |
| 2.2.1 培养基 | 第29页 |
| 2.2.2 发酵产物处理液 | 第29页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE蛋白电泳所用试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.5 Weastern-Blotting所用试剂 | 第31页 |
| 2.2.6 间接ELISA所用试剂 | 第31-32页 |
| 2.3 方法 | 第32-41页 |
| 2.3.1 猪瘟病毒E0基因的扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.2 表达载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.3 重组酵母的构建及筛选 | 第35-38页 |
| 2.3.4 重组酵母的发酵 | 第38-39页 |
| 2.3.5 表达产物的SDS-PAGE和Western-Blotting鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.6 表达产物的浓缩和过滤 | 第40页 |
| 2.3.7 表达产物的纯化 | 第40-41页 |
| 2.3.8 ELISA鉴定纯化蛋白的反应原性 | 第41页 |
| 2.4 结果与分析 | 第41-51页 |
| 2.4.1 目的基因的获取与PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.2 目的基因与载体连接产物的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.4.3 重组酵母的构建及筛选 | 第44-46页 |
| 2.4.4 筛选子的菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4.5 表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第47-49页 |
| 2.4.6 表达产物的Western-Blotting鉴定 | 第49-50页 |
| 2.4.7 纯化蛋白的ELISA鉴定 | 第50-51页 |
| 2.5 讨论 | 第51-54页 |
| 2.5.1 表达系统和表达载体的选择 | 第51-52页 |
| 2.5.2 猪瘟病毒E0基因在毕赤酵母表达系统中的整合和筛选 | 第52页 |
| 2.5.3 E0蛋白在毕赤酵母中的表达条件及表达方式 | 第52-54页 |
| 3 猪瘟病毒E0蛋白在哺乳动物表达系统中的表达 | 第54-67页 |
| 3.1 材料 | 第54页 |
| 3.1.1 细胞及质粒 | 第54页 |
| 3.1.2 工具酶及试剂 | 第54页 |
| 3.1.3 仪器及设备 | 第54页 |
| 3.2 试验所需溶液及培养基的配制 | 第54-55页 |
| 3.2.1 DMEM培养基的配制 | 第54-55页 |
| 3.2.2 冻存液的配制 | 第55页 |
| 3.2.3 灭活的胎牛血清 | 第55页 |
| 3.2.4 G418储存液的配制 | 第55页 |
| 3.3 方法 | 第55-61页 |
| 3.3.1 猪瘟病毒E0基因的扩增 | 第55-56页 |
| 3.3.2 重组质粒的构建和鉴定 | 第56-58页 |
| 3.3.3 重组质粒的转化和筛选 | 第58-61页 |
| 3.3.4 观察目的蛋白的表达情况 | 第61页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第61-65页 |
| 3.4.1 载体的构建 | 第61-64页 |
| 3.4.2 E0基因表达产物的检测 | 第64-65页 |
| 3.5 讨论 | 第65-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 英文缩写词汇表 | 第74-76页 |
| 个人简历 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
