| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| 1.1 脂肪酸简介 | 第12-13页 |
| 1.2 脂蛋白简介 | 第13-15页 |
| 1.3 乳酸菌食品级表达系统 | 第15-19页 |
| 1.3.1 食品级表达系统的定义 | 第15页 |
| 1.3.2 乳酸菌的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.3 乳酸菌与人类健康 | 第16-17页 |
| 1.3.4 乳酸链球菌素 | 第17-18页 |
| 1.3.5 乳酸菌食品级表达系统研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 肥胖症 | 第19-24页 |
| 1.4.1 肥胖的定义 | 第19-20页 |
| 1.4.2 肥胖的起因 | 第20-22页 |
| 1.4.3 肥胖的危害 | 第22-23页 |
| 1.4.4 脂肪的分类 | 第23-24页 |
| 1.5 亚油酸异构酶简介 | 第24-25页 |
| 1.6 共轭亚油酸 | 第25-27页 |
| 1.6.1 共轭亚油酸的定义和分类 | 第25页 |
| 1.6.2 共轭亚油酸对人和动物健康的影响 | 第25-27页 |
| 1.6.3 共轭亚油酸对脂肪酸代谢的影响 | 第27页 |
| 1.7 pai基因的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.8 研究意义和技术路线 | 第28-31页 |
| 1.8.1 研究目的 | 第28页 |
| 1.8.2 研究意义 | 第28-29页 |
| 1.8.3 方法和技术路线 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-37页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、引物和实验动物 | 第31-34页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第34页 |
| 2.1.3 实验所用溶液和培养基的配制 | 第34-37页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-57页 |
| 2.2.1 乳酸乳球菌中质粒的小量提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2 乳酸乳球菌NZ3900感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.3 PCR扩增pai基因片段 | 第38-39页 |
| 2.2.4 PCR扩增产物和质粒DNA的酶切及回收 | 第39页 |
| 2.2.5 基因片段与载体的连接 | 第39-40页 |
| 2.2.6 连接产物的纯化 | 第40页 |
| 2.2.7 连接产物电转化乳酸乳球菌感受态细胞 | 第40页 |
| 2.2.8 阳性转化子的筛选及鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.9 重组菌株诱导表达和气相色谱分析脂肪酸含量 | 第41页 |
| 2.2.10 重叠PCR引入定点突变 | 第41-42页 |
| 2.2.11 Western blot检测PAI蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 2.2.12 含乳酸菌正常脂含量和高脂饲料的配制 | 第43-44页 |
| 2.2.13 动物饲喂 | 第44页 |
| 2.2.14 动物取材 | 第44-45页 |
| 2.2.15 肝脏和脂肪组织的组织化学分析 | 第45-46页 |
| 2.2.16 肝脏和脂肪组织脂代谢相关基因的RT-qPCR分析 | 第46-47页 |
| 2.2.17 真核表达载体pPAI-IRES2-AcGFP1的构建 | 第47-50页 |
| 2.2.18 细胞的冻存与复苏 | 第50-51页 |
| 2.2.19 NIH/3T3细胞的培养与传代 | 第51页 |
| 2.2.20 MTT法细胞计数 | 第51页 |
| 2.2.21 NIH/3T3细胞的转染与筛选 | 第51页 |
| 2.2.22 转基因细胞系的鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.23 脂肪酸含量的测定 | 第52-53页 |
| 2.2.24 真核表达载体CAGGS-pai的构建 | 第53页 |
| 2.2.25 pai转基因小鼠鼠尾基因组提取 | 第53页 |
| 2.2.26 pai转基因小鼠Founder的鉴定 | 第53-55页 |
| 2.2.27 Tail-PCR方法定位外源基因 | 第55-56页 |
| 2.2.28 Realtime PCR分析转基因小鼠组织和器官中pai基因的转录 | 第56页 |
| 2.2.29 数据分析方法 | 第56-57页 |
| 第三章 产t10c12-CLA乳酸球菌对昆明白小鼠生长和生理参数的影响 | 第57-80页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 实验结果 | 第58-74页 |
| 3.2.1 表达载体pNZ8149-pai的构建和阳性菌株的鉴定 | 第58页 |
| 3.2.2 重组乳酸乳球菌脂肪酸含量分析 | 第58-60页 |
| 3.2.3 探究PAI第17位氨基酸突变后酶失活的原因 | 第60-62页 |
| 3.2.4 饲喂不同脂含量饲料添加乳酸菌的昆明白小鼠体重增长 | 第62-63页 |
| 3.2.5 饲喂不同脂含量饲料添加乳酸菌的昆明白小鼠组织器官相对质量 | 第63页 |
| 3.2.6 饲喂不同脂含量饲料添加乳酸菌的昆明白小鼠血清胆固醇分析 | 第63-66页 |
| 3.2.7 饲喂不同脂含量饲料添加乳酸菌的昆明白小鼠各组织脂肪酸含量分析 | 第66-71页 |
| 3.2.8 饲喂不同脂含量饲料添加乳酸菌小鼠肝脏和腹部脂肪的组织化学分析 | 第71-72页 |
| 3.2.9 肝脏和脂肪组织中脂代谢相关基因的表达量分析 | 第72-74页 |
| 3.3 结论和讨论 | 第74-80页 |
| 第四章 亚油酸异构酶在哺乳动物细胞和转基因小鼠中的表达 | 第80-106页 |
| 4.1 引言 | 第80-81页 |
| 4.2 实验结果 | 第81-101页 |
| 4.2.1 真核表达载体pPAI-IRES2-AcGFP1的构建 | 第81页 |
| 4.2.2 脂质体转染后筛选稳定表达的阳性细胞株 | 第81-83页 |
| 4.2.3 脂肪酸含量的分析 | 第83-84页 |
| 4.2.4 不同脂肪酸添加对细胞内脂肪代谢的影响 | 第84-88页 |
| 4.2.5 真核表达载体CAGGS-pai的构建 | 第88页 |
| 4.2.6 准备显微注射用pai基因片段 | 第88-89页 |
| 4.2.7 pai转基因小鼠Founder的鉴定 | 第89页 |
| 4.2.8 RT-PCR和RT-qPCR分析转基因小鼠组织和器官中pai基因的转录 | 第89-91页 |
| 4.2.9 18号家系外源基因定位分析 | 第91-95页 |
| 4.2.10 18号转基因小鼠三周龄体重分析 | 第95-96页 |
| 4.2.11 饲喂不同脂含量饲料对转基因小鼠组织器官相对质量的影响 | 第96页 |
| 4.2.12 血清胆固醇分析 | 第96-97页 |
| 4.2.13 各组织器官脂肪酸含量分析 | 第97-100页 |
| 4.2.14 肝脏和脂肪组织中脂代谢相关基因的表达量分析 | 第100-101页 |
| 4.3 讨论 | 第101-106页 |
| 第五章 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录 | 第117-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 作者简介 | 第124页 |
