siRNA特异性及脱靶效应的研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-30页 |
| ·RNAi的研究历史及概况 | 第13-15页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第15-20页 |
| ·转录后沉默机制 | 第16-19页 |
| ·基因组甲基化机制 | 第19-20页 |
| ·RNAi技术应用 | 第20-21页 |
| ·研究基因功能 | 第20-21页 |
| ·疾病治疗 | 第21页 |
| ·siRNA的脱靶效应 | 第21-25页 |
| ·基于SiQuant的双荧光报告检测技术 | 第25-29页 |
| ·研究目的及研究内容 | 第29-30页 |
| 2 实验方法与材料 | 第30-38页 |
| ·质粒构建 | 第30-33页 |
| ·寡核苷酸片断退火配对 | 第30页 |
| ·靶位点与载体连接 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR阳性克隆鉴定 | 第31页 |
| ·选取阳性克隆 | 第31页 |
| ·提取质粒 | 第31-32页 |
| ·质粒测序 | 第32-33页 |
| ·siRNA及靶位点设计 | 第33-34页 |
| ·细胞培养与转染 | 第34-36页 |
| ·HEK293细胞培养 | 第34-35页 |
| ·铺板 | 第35页 |
| ·转染 | 第35-36页 |
| ·荧光活性测定 | 第36-37页 |
| ·Northern blot | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-47页 |
| ·siRNA错配容忍模式由碱基所处位置决定 | 第38-40页 |
| ·siRNA各位点单碱基错配容忍图谱 | 第40-44页 |
| ·设计等位基因特异性siRNA | 第44-47页 |
| 4 总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-65页 |
| 附录1 主要实验试剂及仪器 | 第53-55页 |
| 附录2 实验所用靶位点片断序列 | 第55-65页 |
