| 致谢 | 第5-6页 |
| 前言 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-19页 |
| 第1章 绪论 | 第19-32页 |
| 1.1 线粒体的基本结构和功能 | 第19-20页 |
| 1.2 线粒体动态平衡的分子调节机制 | 第20-23页 |
| 1.3 线粒体动态平衡紊乱导致的缺陷与疾病 | 第23-24页 |
| 1.4 卵母细胞中线粒体的动态调节功能 | 第24-27页 |
| 1.5 线粒体在颗粒细胞中的特征和功能 | 第27-30页 |
| 1.6 总结与讨论 | 第30-32页 |
| 第2章 Miga基因敲除小鼠的制备 | 第32-44页 |
| 2.1 引言 | 第32-36页 |
| 2.2 实验材料和试剂 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-39页 |
| 2.4 研究结果 | 第39-42页 |
| 2.4.1 Miga1~(-/-)小鼠的敲除策略与结果分析 | 第39页 |
| 2.4.2 Miga2~(-/-)小鼠的敲除策略及Miga2在小鼠中的初步分析 | 第39-41页 |
| 2.4.3 Miga1/2基因敲除小鼠的产生及其表型的初步分析 | 第41-42页 |
| 2.5 总结与讨论 | 第42-44页 |
| 第3章 MIGA1/2在细胞中对线粒体形态及功能的研究 | 第44-66页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第44-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-53页 |
| 3.3.1 细胞培养条件 | 第49页 |
| 3.3.2 Trizol试剂提取细胞RNA | 第49-50页 |
| 3.3.3 RNA体外逆转录 | 第50-51页 |
| 3.3.4 荧光实时定量PCR | 第51页 |
| 3.3.5 免疫荧光技术 | 第51页 |
| 3.3.6 活细胞实时监测方法 | 第51-52页 |
| 3.3.7 流式细胞仪检测细胞周期和线粒体膜电位 | 第52页 |
| 3.3.8 MTT检测细胞活力 | 第52页 |
| 3.3.9 激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位 | 第52-53页 |
| 3.3.10 透射电镜技术 | 第53页 |
| 3.3.11 统计分析 | 第53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-62页 |
| 3.4.1 MIGA1/2是非常保守的线粒体蛋白 | 第53-54页 |
| 3.4.2 Miga突变后使细胞中线粒体形态片段化且活性下降 | 第54-57页 |
| 3.4.3 Miga敲除后提高活性氧ROS水平并降低细胞代谢 | 第57-58页 |
| 3.4.4 线粒体超显微结构遭到破坏 | 第58-60页 |
| 3.4.5 线粒体融合功能下降 | 第60-61页 |
| 3.4.6 Miga1/2丧失后导致细胞ROS的升高和ATP产量的降低 | 第61-62页 |
| 3.4.7 Miga1/2 RNAi后引起HeLa细胞生长轻微阻滞 | 第62页 |
| 3.5 总结与讨论 | 第62-66页 |
| 第4章 MIGA1/2在小鼠卵母细胞成熟及早期胚胎发育中的研究 | 第66-94页 |
| 4.1 引言 | 第66-67页 |
| 4.2 实验材料与试剂 | 第67-71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-75页 |
| 4.3.1 小鼠基因组提取与基因型鉴定 | 第71-72页 |
| 4.3.2 卵母细胞体外培养 | 第72页 |
| 4.3.3 卵母细胞中ROS的检测 | 第72页 |
| 4.3.4 卵母细胞中免疫荧光 | 第72页 |
| 4.3.5 超数排卵和受精 | 第72-73页 |
| 4.3.6 线粒体DNA拷贝数的定量检测 | 第73页 |
| 4.3.7 ATP含量检测 | 第73页 |
| 4.3.8 透射电子显微镜技术 | 第73-74页 |
| 4.3.9 染色体铺片 | 第74页 |
| 4.3.10 统计分析 | 第74-75页 |
| 4.4 结果 | 第75-90页 |
| 4.4.1 线粒体功能维持卵母细胞减数分裂成熟 | 第75-77页 |
| 4.4.2 Miga1/2敲除后导致小鼠生殖力降低且卵母细胞质量下降 | 第77-79页 |
| 4.4.3 Miga1/2敲除卵母细胞线粒体结构与功能受损 | 第79-82页 |
| 4.4.4 卵母细胞中内质网与线粒体共同聚集 | 第82页 |
| 4.4.5 在卵母细胞中特异性敲除Miga2同样导致线粒体形态聚集 | 第82-84页 |
| 4.4.6 Miga1/2敲除后卵母细胞染色体分离异常 | 第84-85页 |
| 4.4.7 Miga1/2敲除的卵母细胞受精后发育能力降低 | 第85-88页 |
| 4.4.8 维生素C和ATP能够部分挽救Miga1/2敲除的卵母细胞缺陷 | 第88-90页 |
| 4.5 总结与讨论 | 第90-94页 |
| 第5章 MIGA1/2在雌性小鼠生殖内分泌中的作用 | 第94-116页 |
| 5.1 引言 | 第94页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第94-97页 |
| 5.3 实验方法 | 第97-101页 |
| 5.3.1 颗粒细胞的获取与处理方法 | 第97页 |
| 5.3.2 体外培养颗粒细胞的线粒体活性检测 | 第97页 |
| 5.3.3 流式细胞检测细胞ROS含量 | 第97-98页 |
| 5.3.4 细胞免疫荧光 | 第98页 |
| 5.3.5 颗粒细胞的荧光定量 | 第98页 |
| 5.3.6 血液与颗粒细胞培养液中激素检测 | 第98-99页 |
| 5.3.7 HE染色和免疫组化 | 第99页 |
| 5.3.8 免疫组织荧光染色 | 第99-100页 |
| 5.3.9 TUNEL实验 | 第100页 |
| 5.3.10 颗粒细胞的电镜观察 | 第100页 |
| 5.3.11 Western Blot | 第100-101页 |
| 5.4 实验结果 | 第101-114页 |
| 5.4.1 Miga1/2~(-/-)小鼠生殖力显著下降并伴随大量卵巢闭锁 | 第101-104页 |
| 5.4.2 Miga1/2~(-/-)小鼠卵泡中COC扩展受到抑制 | 第104-106页 |
| 5.4.3 CCCP和Mdivi-1降低颗粒细胞对FSK/PMA的反应 | 第106-108页 |
| 5.4.4 在Miga1/2~(-/-)小鼠卵巢中排卵受阻 | 第108-110页 |
| 5.4.5 线粒体形态及相关功能随FSK/PMA的处理时间而改变 | 第110-113页 |
| 5.4.6 CYP11A1在线粒体中的蛋白表达水平下降 | 第113-114页 |
| 5.5 总结与讨论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-135页 |
| 附录 | 第135-138页 |
| 附录1. RT-PCR引物序列 | 第135-137页 |
| 附录2. siRNA序列 | 第137-138页 |
| 作者简介 | 第138页 |
