| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 脂肪组织与脂肪细胞概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 脂肪组织与脂肪细胞的分类 | 第12页 |
| 1.1.2 脂肪组织的主要功能 | 第12-14页 |
| 1.2 脂肪细胞分化的分子调控 | 第14-15页 |
| 1.3 FGF1、FGF10和FGF21基因研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 FGF家族概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 FGF1研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.3 FGF10研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.4 FGF21研究进展 | 第18-19页 |
| 第二章 山羊FGF1、FGF10和FGF21基因的克隆及序列分析 | 第19-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 试验动物与样品采集 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及cDNA合成 | 第20页 |
| 2.2.2 克隆引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.3 山羊FGF1、FGF10和FGF21基因的PCR扩增 | 第21页 |
| 2.2.4 PCR产物回收 | 第21页 |
| 2.2.5 目的基因的连接与转化 | 第21-22页 |
| 2.2.6 重组子的筛选与鉴定 | 第22页 |
| 2.2.7 序列分析 | 第22页 |
| 2.3 试验结果 | 第22-28页 |
| 2.3.1 山羊FGF1、FGF10和FGF21基因克隆 | 第22-23页 |
| 2.3.2 山羊FGF1、FGF10和FGF21基因序列分析 | 第23-28页 |
| 2.3.2.1 蛋白质基本理化性质预测 | 第23-24页 |
| 2.3.2.2 蛋白质结构及亚细胞定位预测 | 第24-26页 |
| 2.3.2.3 氨基酸序列的同源性比对及构建进化树 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 FGF1、FGF10、FGF21及其受体的表达特性 | 第30-37页 |
| 3.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 试验动物与样品采集 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-32页 |
| 3.2.1 总RNA的提取及cDNA合成 | 第31页 |
| 3.2.2 定量引物设计 | 第31-32页 |
| 3.2.3 山羊FGF1、FGF10、FGF21及其受体的组织表达情况 | 第32页 |
| 3.2.4 数据分析 | 第32页 |
| 3.3 试验结果 | 第32-34页 |
| 3.3.1 山羊FGF1、FGF10与FGF21的组织表达情况 | 第32-33页 |
| 3.3.2 山羊FGFRs的组织表达情况 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-36页 |
| 3.5 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 腺病毒超表达载体的构建及干扰SIRNA的合成 | 第37-47页 |
| 4.1 试验材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第38页 |
| 4.2 试验方法 | 第38-42页 |
| 4.2.1 腺病毒超表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 4.2.1.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 4.2.1.2 山羊FGF1、FGF10和FGF21基因CDS区的PCR扩增及回收 | 第39页 |
| 4.2.1.3 连接与转化 | 第39页 |
| 4.2.1.4 构建腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV-FGF | 第39-40页 |
| 4.2.1.5 制备感受态细胞BJ5183 | 第40页 |
| 4.2.1.6 构建重组腺病毒载体pAd Easy-FGF | 第40-41页 |
| 4.2.1.7 腺病毒的包装扩增 | 第41页 |
| 4.2.2 干扰siRNA的合成 | 第41-42页 |
| 4.2.2.1 干扰siRNA的化学合成 | 第41-42页 |
| 4.2.2.2 siRNA干扰效果筛选及检测 | 第42页 |
| 4.3 试验结果 | 第42-45页 |
| 4.3.1 腺病毒超表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 4.3.1.1 腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV-FGF的构建 | 第42-43页 |
| 4.3.1.2 重组腺病毒载体pAd Easy-FGF的鉴定 | 第43页 |
| 4.3.1.3 腺病毒的包装扩增 | 第43-44页 |
| 4.3.2 siRNA干扰效率检测 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.4.1 腺病毒超表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.4.2 干扰siRNA | 第46页 |
| 4.5 小结 | 第46-47页 |
| 第五章 FGF1、FGF10和FGF21基因对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 | 第47-61页 |
| 5.1 试验材料 | 第47-48页 |
| 5.1.1 试验动物 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第48页 |
| 5.2 试验方法 | 第48-50页 |
| 5.2.1 山羊肌内前体脂肪细胞的分离与鉴定 | 第48-49页 |
| 5.2.1.1 样品采集及其前处理 | 第48页 |
| 5.2.1.2 山羊肌内前体脂肪细胞的分离及原代培养 | 第48页 |
| 5.2.1.3 山羊肌内前体脂肪细胞的传代培养 | 第48-49页 |
| 5.2.1.4 山羊肌内前体脂肪细胞的诱导分化及鉴定 | 第49页 |
| 5.2.2 FGF1、FGF10、FGF21及FGFRs基因在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式 | 第49页 |
| 5.2.3 干扰FGF1、FGF10和FGF21基因对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 | 第49页 |
| 5.2.4 超表达FGF1、FGF10和FGF21基因对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 | 第49-50页 |
| 5.3 试验结果 | 第50-56页 |
| 5.3.1 山羊肌内脂肪细胞的形态学观察 | 第50-51页 |
| 5.3.2 FGF1、FGF10、FGF21及FGFRs在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式 | 第51-53页 |
| 5.3.2.1 FGF1、FGF10和FGF21基因表达模式 | 第51-52页 |
| 5.3.2.2 FGFRs基因表达模式 | 第52-53页 |
| 5.3.3 超表达及干扰FGF1、FGF10和FGF21后对脂肪分化标志基因及FGFRs表达水平的影响 | 第53-56页 |
| 5.3.3.1 超表达及干扰FGF1后对脂肪分化标志基因及FGFRs表达水平的影响 | 第53-54页 |
| 5.3.3.2 超表达及干扰FGF10后对脂肪分化标志基因及FGFRs表达水平的影响 | 第54-55页 |
| 5.3.3.3 超表达及干扰FGF21后对脂肪分化标志基因及FGFRs表达水平的影响 | 第55-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-60页 |
| 5.4.1 山羊肌内前体脂肪细胞培养体系的构建 | 第56-57页 |
| 5.4.2 FGF1对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 | 第57-58页 |
| 5.4.3 FGF10对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 | 第58-59页 |
| 5.4.4 FGF21对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 | 第59-60页 |
| 5.5 小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 附录一 研究生期间发表论文 | 第73-75页 |
| 附录二 研究生期间主持及参与项目列表 | 第75-76页 |
| 附录三 山羊FGF1、FGF10和FGF21基因核苷酸序列及编码氨基酸序列 | 第76-79页 |
| 附录四 基因的溶解曲线及标准曲线 | 第79-83页 |
| 附录五 pGM-T、p MD-19T及pAdTrack-CMV质粒图谱 | 第83-85页 |
| 附录六 FGF1基因在山羊前体脂肪细胞分化过程中的表达差异 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
