| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 李斯特菌属 | 第13页 |
| 2 单增李斯特菌与公共卫生 | 第13-17页 |
| 3 单增李斯特菌的感染机制 | 第17-19页 |
| 4 单增李斯特菌毒力因子的调控机制 | 第19-24页 |
| 4.1 粘附与侵袭相关因子 | 第19-20页 |
| 4.2 胞内吞噬体及逃逸相关因子 | 第20-22页 |
| 4.3 单增李斯特菌毒力调控因子Prf A | 第22-24页 |
| 5 单增李斯特菌鞭毛形成调控机制 | 第24-25页 |
| 6 细菌硫氧还蛋白系统概述 | 第25-28页 |
| 6.1 硫氧还蛋白系统（Trx） | 第25-26页 |
| 6.2 硫氧还蛋白生物学功能 | 第26-28页 |
| 6.2.1 Trx参与维持氧化还原系统的平衡 | 第26-27页 |
| 6.2.2 Trx在氧化应激诱导细胞凋亡中的作用 | 第27页 |
| 6.2.3 Trx对蛋白质的还原和修饰 | 第27-28页 |
| 7 研究目的 | 第28-30页 |
| 第二部分 试验研究 | 第30-92页 |
| 第一章 单增李斯特菌硫氧还蛋白Trx A酶学特性研究 | 第31-46页 |
| 1 材料与方法 | 第31-40页 |
| 1.2 菌株及培养条件 | 第31页 |
| 1.3 试剂订购 | 第31-32页 |
| 1.4 仪器及型号 | 第32-34页 |
| 1.5 E.coli感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 1.6 生物信息学分析 | 第35页 |
| 1.7 Trx A蛋白关键氨基酸突变体表达载体构建 | 第35-38页 |
| 1.8 Trx A突变体重组蛋白的表达及纯化 | 第38-39页 |
| 1.9 Trx A蛋白的二硫键氧化还原酶活性 | 第39-40页 |
| 2 试验结果 | 第40-43页 |
| 2.1 单增李斯特菌Trx A属于经典的硫氧还蛋白家族 | 第40-41页 |
| 2.2 Trx A保守位点突变体重组质粒阳性验证 | 第41-42页 |
| 2.3 Trx A及其关键氨基酸突变体蛋白的获得 | 第42-43页 |
| 2.4 单增李斯特菌Trx A具有氧化还原酶活性 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 第二章 单增李斯特菌Trx A生物学功能研究 | 第46-92页 |
| 第一节 单增李斯特菌Trx A抗氧化应激机制的研究 | 第46-58页 |
| 1 材料与方法 | 第46-52页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第46页 |
| 1.2 质粒、酶及试剂盒 | 第46页 |
| 1.3 试验耗材及仪器 | 第46页 |
| 1.4 试剂配制 | 第46页 |
| 1.5 单增李斯特菌感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| 1.6 trx A回补株的构建 | 第47-48页 |
| 1.7 trx A突变株体外生长能力试验 | 第48-49页 |
| 1.8 体外氧化诱导蛋白表达水平试验 | 第49-50页 |
| 1.9 肼应激下trx A全基因组转录组测序 | 第50页 |
| 1.10 DNase I处理二次纯化 | 第50-51页 |
| 1.11 荧光定量分析基因转录水平变化 | 第51-52页 |
| 2 试验结果 | 第52-56页 |
| 2.1 Western blot分析trx A回补株蛋白水平的表达 | 第52页 |
| 2.2 单增李斯特菌Trx A介导细菌在氧化应激环境中的生长能力 | 第52-53页 |
| 2.3 Western blot分析在不同氧化应激下Trx A和Trx B的表达水平变化 | 第53-54页 |
| 2.4 氧化应激下trx A表现出单增李斯特菌毒力基因表达谱的改变 | 第54-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第二节 单增李斯特菌Trx A参与细菌毒力机制的研究 | 第58-83页 |
| 1 材料与方法 | 第58-70页 |
| 1.1 菌株、细胞及培养条件 | 第58页 |
| 1.2 试剂配制 | 第58页 |
| 1.3 质粒、酶、试剂盒和仪器 | 第58页 |
| 1.4 试验方法 | 第58-63页 |
| 1.4.1 Prf A原核表达重组质粒构建 | 第58-63页 |
| 1.4.2 Prf A表达纯化和多克隆抗体制备 | 第63页 |
| 1.5 sig H原核表达重组质粒的构建 | 第63-64页 |
| 1.6 凝胶迁移阻滞试验（EMSA） | 第64-65页 |
| 1.7 Western blot检测Trx A对相关毒力蛋白表达影响 | 第65页 |
| 1.7.1 菌体蛋白样品制备 | 第65页 |
| 1.7.2 Western blot试验 | 第65页 |
| 1.8 溶血试验 | 第65-66页 |
| 1.9 细胞粘附、侵袭及增殖试验 | 第66-67页 |
| 1.10 细胞内定位试验 | 第67-68页 |
| 1.11 小鼠脏器增殖试验 | 第68页 |
| 1.12 ITC试验 | 第68-70页 |
| 2 试验结果 | 第70-80页 |
| 2.1 prf A阳性重组质粒的验证 | 第70-71页 |
| 2.2 Prf A重组蛋白的表达和纯化 | 第71-72页 |
| 2.3 Prf A重组蛋白多克隆抗体的制备及检测 | 第72页 |
| 2.4 Western blot验证trx A突变后单增李斯特菌毒力相关蛋白的表达降低 | 第72-75页 |
| 2.5 单增李斯特菌Trx A调控溶血素LLO的表达及分泌 | 第75-76页 |
| 2.6 单增李斯特菌Trx A参与细胞粘附、侵袭及增殖 | 第76-77页 |
| 2.7 单增李斯特菌Trx A介导细菌细胞内迁移 | 第77页 |
| 2.8 单增李斯特菌Trx A参与小鼠脏器内增殖 | 第77-78页 |
| 2.9 Sig H与trx相关基因启动子结合 | 第78-79页 |
| 2.10 单增李斯特菌Trx A与Prf A相互作用 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 第三节 单增李斯特菌Trx A参与细菌鞭毛运动机制的研究 | 第83-92页 |
| 1 材料与方法 | 第83-84页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第83页 |
| 1.2 试剂配制 | 第83页 |
| 1.3 细菌运动性试验 | 第83页 |
| 1.4 trx A突变株鞭毛透射电镜观察 | 第83-84页 |
| 1.5 Mog R、Gma R及Trx A相关突变体蛋白的纯化 | 第84页 |
| 1.6 ITC试验分析Trx A及其突变体蛋白与Mog R和Gma R关系 | 第84页 |
| 2 试验结果 | 第84-90页 |
| 2.1 重组蛋白Mog R和Gma R的获得 | 第84-85页 |
| 2.2 单增李斯特菌Trx A介导细菌运动 | 第85-86页 |
| 2.3 单增李斯特菌Trx A参与鞭毛形成 | 第86-87页 |
| 2.4 单增李斯特菌Trx A与Mog R互作 | 第87-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 展望 | 第93-94页 |
| 1 单增李斯特菌硫氧还蛋白Trx A与细菌致病机制 | 第93页 |
| 2 单增李斯特菌硫氧还蛋白Trx A与鞭毛相关蛋白的关系 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录Ⅰ 中英文对照 | 第104-105页 |
| 附录Ⅱ 试验所需引物 | 第105-107页 |
| 附录Ⅲ trx A影响全基因组转录谱变化的结果数据 | 第107-117页 |
| 个人简历 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
