| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 论文缩写词中英文对照 | 第6-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 蛋白生物杀虫剂的来源与种类 | 第9-12页 |
| 1.1.1 来源 | 第9页 |
| 1.1.2 种类 | 第9-12页 |
| 1.2 黑胸败血芽孢杆菌的致病机制 | 第12-15页 |
| 1.3 本论文的研究目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验质粒、菌株、细胞和动物 | 第17页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要消耗品及其处理方法 | 第18页 |
| 2.1.4 培养基及常用溶液 | 第18-19页 |
| 2.1.5 SDS-PAGE相关试剂 | 第19页 |
| 2.1.6 蛋白质纯化试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.7 蛋白质印记试剂 | 第20页 |
| 2.1.8 主要仪器及设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-35页 |
| 2.2.1 实时荧光定量PCR检测hydralysin-2 基因转录活性 | 第21-23页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第23-28页 |
| 2.2.3 SUMO-hydralysin-2 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第28页 |
| 2.2.4 hydralysin-2 蛋白的纯化 | 第28-32页 |
| 2.2.5 hydralysin-2 对昆虫细胞的毒性作用 | 第32-33页 |
| 2.2.6 hydralysin-2 杀虫效果的生物学实验 | 第33-34页 |
| 2.2.7 CCK8法检测hydralysin-2 对HepG2细胞的杀伤活性 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 hydralysin-2 氨基酸序列的分析 | 第35页 |
| 3.2 hydralysin-2 基因在体内和体外表达活性检测 | 第35-37页 |
| 3.3 hydralysin-2 重组蛋白的表达和纯化 | 第37-44页 |
| 3.3.1 SUMO基因和hydralysin-2 基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.3.2 SUMO-hydralysin-2 融合基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重组表达载体的构建与转化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 融合蛋白SUMO-hydralysin-2 的表达 | 第39-40页 |
| 3.3.5 融合蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 3.3.6 融合蛋白的酶切和hydralysin-2 蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| 3.3.7 hydralysin-2 蛋白的MALDI-TOF/TOF-MS质谱鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4 hydralysin-2 对昆虫细胞的毒性 | 第44-48页 |
| 3.4.1 hydralysin-2 对Bm-12和S2细胞增殖的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.2 hydralysin-2 对Bm-12细胞的穿孔活性 | 第45-46页 |
| 3.4.3 扫描电镜观察hydralysin-2 处理对Bm-12细胞的影响 | 第46-48页 |
| 3.5 hydralysin-2 对家蚕个体的毒性 | 第48-50页 |
| 3.5.1 注射hydralysin-2 对家蚕的毒性 | 第48-49页 |
| 3.5.2 喂食hydralysin-2 对家蚕的毒性 | 第49-50页 |
| 3.6 hydralysin-2 对肝癌细胞HepG2的杀伤活性 | 第50-51页 |
| 4 讨论与全文总结 | 第51-55页 |
| 4.1 讨论 | 第51-53页 |
| 4.1.1 定量PCR检测hydralysin-2 的表达 | 第51页 |
| 4.1.2 融合蛋白的表达和纯化 | 第51-52页 |
| 4.1.3 hydralysin-2 对昆虫细胞的作用 | 第52页 |
| 4.1.4 hydralysin-2 对家蚕的毒杀作用 | 第52-53页 |
| 4.2 全文总结 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 本论文研究受到以下项目的资助 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
