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AcMNPV病毒感染Sf9细胞引发自噬响应的初步研究

摘要第2-4页
Abstract第4-5页
论文缩略词中英文对照第6-9页
1 前言第9-20页
    1.1 细胞自噬的分类第9-10页
    1.2 自噬相关蛋白第10页
    1.3 昆虫免疫第10-13页
        1.3.1 昆虫的细胞免疫第11页
        1.3.2 昆虫的体液免疫第11-13页
    1.4 自噬与免疫的关系第13-17页
        1.4.1 宿主自噬识别病毒的信号通路第14-15页
        1.4.2 自噬对病毒的抑制效应第15页
        1.4.3 自噬抑制病毒的复制第15-16页
        1.4.4 自噬清除病毒蛋白第16页
        1.4.5 病毒逃逸自噬的机制第16-17页
    1.5 昆虫杆状病毒第17-19页
        1.5.1 AcMNPV病毒与细胞自噬第18-19页
    1.6 本文研究的目的、意义和内容第19-20页
2 材料与方法第20-35页
    2.1 实验材料第20-25页
        2.1.1 昆虫细胞、质粒、菌株、病毒第20-21页
        2.1.2 主要消耗品的处理方法第21页
        2.1.3 主要设备和仪器第21-22页
        2.1.4 主要药品和试剂第22页
        2.1.5 主要耗材第22-23页
        2.1.6 常用溶液的配制第23-24页
        2.1.7 抗体第24-25页
    2.2 实验方法第25-34页
        2.2.1 重组病毒GFP-AcMNPV的纯化与制备第25页
        2.2.2 重组病毒DsRed-AcMNPV的DNA提取和PCR鉴定第25-27页
        2.2.3 重组病毒DsRed-AcMNPV的制备与增殖第27页
        2.2.4 Lyso-Tracker Red染色镜检第27-28页
        2.2.5 AcMNPV诱导Sf9细胞的过表达检测第28-30页
        2.2.6 Western blotting实验第30-32页
        2.2.7 TEM生物样品制备流程第32-33页
        2.2.8 细胞毒性检测第33页
        2.2.9 氯喹抑制自噬实验第33页
        2.2.10 病毒紫外灭活病毒实验第33-34页
        2.2.11 病毒滴度实验第34页
    2.3 实验重复和统计方法第34-35页
    2.4 western blotting灰度扫描分析第35页
3 结果与分析第35-48页
    3.1 制备纯化的重组病毒和对Sf9细胞的感染活性检测第35-36页
    3.2 AcMNPV感染Sf9细胞引发自噬的Lyso-Tracker Red检测第36-39页
    3.3 AcMNPV感染细胞中的自噬体膜泡和ATG8-PE荧光斑点表达第39-41页
    3.4 AcMNPV感染Sf9细胞引发自噬响应的ATG8-PE表达第41-42页
    3.5 紫外灭活AcMNPV感染Sf9细胞引发自噬响应的ATG8-PE表达第42-44页
    3.6 AcMNPV感染Sf9宿主引发的自噬响应对病毒增殖的影响第44-48页
        3.6.1 氯喹对Sf9细胞的毒理实验检测第45页
        3.6.2 氯喹抑制病毒-Sf9细胞自噬响应实验中ATG8-PE表达上调第45-46页
        3.6.3 氯喹抑制病毒-Sf9细胞自噬响应实验中病毒增殖不受影响第46-48页
4 讨论与全文总结第48-51页
    4.1 讨论第48-50页
    4.2 全文总结第50-51页
致谢第51-53页
参考文献第53-60页
附录第60-61页

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