| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| 1.1 哺乳动物卵巢结构与功能 | 第9-10页 |
| 1.2 颗粒细胞对卵泡发育过程的调控研究 | 第10-12页 |
| 1.3 miRNA调控卵巢功能的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 miR-126 调控卵巢功能的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第14页 |
| 1.6 技术路线 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第15页 |
| 2.1.2 实验仪器设备 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-33页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.2 总RNA检测及反转录 | 第18-20页 |
| 2.2.3 q RT-PCR检测 | 第20-22页 |
| 2.2.4 猪卵巢颗粒细胞原代和传代培养 | 第22-23页 |
| 2.2.5 猪卵巢颗粒细胞的接种和转染 | 第23-24页 |
| 2.2.6 猪卵巢颗粒细胞凋亡检测 | 第24页 |
| 2.2.7 猪卵巢颗粒细胞增殖检测 | 第24-25页 |
| 2.2.8 靶基因PIK3R2、TSC1的预测 | 第25页 |
| 2.2.9 构建靶基因双荧光素酶报告载体 | 第25-32页 |
| 2.2.10 双荧光素酶报告系统检测 | 第32页 |
| 2.2.11 Western Blot | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-50页 |
| 3.1 miR1263p对猪卵巢颗粒细胞功能的影响 | 第33-36页 |
| 3.1.1 miR1263p小片段效率检测 | 第33-34页 |
| 3.1.2 miR1263p抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 3.1.3 miR1263p促进猪卵巢颗粒细胞增殖 | 第35-36页 |
| 3.2 miR1263p靶基因的预测及验证 | 第36-43页 |
| 3.2.1 靶基因生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 3.2.2 构建靶基因双荧光素酶报告载体、突变载体及缺失载体 | 第37-40页 |
| 3.2.3 靶基因双荧光活性检测 | 第40-41页 |
| 3.2.4 qRT-PCR检测miR1263p对靶基因转录水平的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.5 Western Blot检测miR1263p对靶基因蛋白水平的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 靶基因TSC1、PIK3R2对猪卵巢颗粒细胞功能的影响 | 第43-48页 |
| 3.3.1 siPIK3R2、siTSC1干扰效率检测 | 第43-44页 |
| 3.3.2 干扰PIK3R2、干扰TSC1抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 3.3.3 干扰PIK3R2、干扰TSC1促进猪卵巢颗粒细胞增殖 | 第45-46页 |
| 3.3.4 干扰PIK3R2检测其通路上下游基因的表达 | 第46-47页 |
| 3.3.5 干扰TSC1检测其通路上下游基因的表达 | 第47-48页 |
| 3.4 miR1263p靶基因PIK3R2、TSC1功能回复验证 | 第48-50页 |
| 3.4.1 靶基因PIK3R2、TSC1细胞凋亡回复验证 | 第48-49页 |
| 3.4.2 靶基因PIK3R2、TSC1细胞增殖回复验证 | 第49-50页 |
| 4 讨论与结论 | 第50-59页 |
| 4.1 miRNA对猪卵巢颗粒细胞功能调控 | 第50-52页 |
| 4.2 miRNA靶基因的预测与验证 | 第52-54页 |
| 4.3 PIK3R2、TSC1在猪卵巢中的研究 | 第54-57页 |
| 4.4 miR1263p靶基因PIK3R2、TSC1功能回复验证 | 第57页 |
| 4.5 结论 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
