优质鸡ALV-B/D/E受体基因tvb遗传多样性分析及其突变位点的功能验证
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词表 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 禽白血病概述 | 第11-12页 |
| 1.2 病原学 | 第12-15页 |
| 1.2.1 ALV分类 | 第12页 |
| 1.2.2 形态特征和理化特性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 基因组结构及功能 | 第13-14页 |
| 1.2.4 病毒的复制与传播 | 第14-15页 |
| 1.3 禽白血病的危害与防控 | 第15-16页 |
| 1.4 禽白血病受体遗传多样性研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 tva遗传多样性研究 | 第16-17页 |
| 1.4.2 tvb遗传多样性研究 | 第17页 |
| 1.4.3 tvc遗传多样性研究 | 第17-18页 |
| 1.4.4 tvj遗传多样性研究 | 第18页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-45页 |
| 2.1 实验试剂与材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 细胞株、鸡苗、毒株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂与酶类 | 第19页 |
| 2.1.3 基因克隆相关材料 | 第19-20页 |
| 2.1.4 Western blot相关材料 | 第20-21页 |
| 2.1.5 仪器与耗材 | 第21-22页 |
| 2.2 广东省大型种鸡场外源性ALV流行病学调查 | 第22-28页 |
| 2.2.1 样品的采集与接种 | 第22页 |
| 2.2.2 细胞收集及检测 | 第22-23页 |
| 2.2.3 阳性样品病毒RNA的抽提 | 第23页 |
| 2.2.4 禽白血病病毒亚群检测 | 第23-24页 |
| 2.2.5 J亚群分离株gp85和U3区的扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.6 目的片段克隆测序 | 第26-27页 |
| 2.2.7 序列分析 | 第27-28页 |
| 2.3 tvb全基因序列分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 样品采集 | 第28页 |
| 2.3.2 全基因组DNA抽提 | 第28页 |
| 2.3.3 PCR引物和测序 | 第28-29页 |
| 2.3.4 tvb全基因扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.5 克隆测序分析 | 第30页 |
| 2.4 tvb~（r3）功能验证 | 第30-45页 |
| 2.4.1 酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.2 tvb 编码区扩增与分析 | 第31-33页 |
| 2.4.3 蛋白表达 | 第33-35页 |
| 2.4.4 RCAS系统的构建 | 第35-41页 |
| 2.4.5 易感性试验 | 第41-42页 |
| 2.4.6 实时荧光定量PCR检测病毒含量 | 第42-44页 |
| 2.4.7 动物实验 | 第44-45页 |
| 3 实验结果与分析 | 第45-68页 |
| 3.1 外源性ALV流行病学分析 | 第45-50页 |
| 3.1.1 种鸡场外源性ALV感染情况 | 第45-47页 |
| 3.1.2 J亚群代表株gp85和U3区序列分析 | 第47-50页 |
| 3.2 tvb遗传多样性分析 | 第50-55页 |
| 3.2.1 tvb全基因序列扩增 | 第51-55页 |
| 3.3 tvb~（r3）产生新的酶切位点 | 第55-56页 |
| 3.4 tvb 突变对转录的影响 | 第56页 |
| 3.5 蛋白表达 | 第56-59页 |
| 3.5.1 构建重组质粒 | 第56-58页 |
| 3.5.2 重组质粒表达 | 第58-59页 |
| 3.6 易感性试验 | 第59-66页 |
| 3.6.1RCAS载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.6.2 重组质粒鉴定 | 第60-61页 |
| 3.6.3 观察绿色荧光蛋白 | 第61页 |
| 3.6.4 流式细胞仪检测细胞感染率 | 第61-66页 |
| 3.7 实时荧光定量PCR | 第66-67页 |
| 3.8 动物实验 | 第67-68页 |
| 4 讨论与结论 | 第68-76页 |
| 4.1 ALV的流行病学分析 | 第68-69页 |
| 4.2 分离毒株特点 | 第69-70页 |
| 4.3 tvb受体蛋白 | 第70-72页 |
| 4.4 tvb遗传抗性评估 | 第72-73页 |
| 4.5 tvb~（r3）的功能验证 | 第73-76页 |
| 4.5.1 tvb~（r3）产生酶切位点 | 第73页 |
| 4.5.2 不同受体基因的蛋白表达 | 第73-74页 |
| 4.5.3 细胞易感性分析 | 第74-75页 |
| 4.5.4 动物攻毒实验 | 第75-76页 |
| 4.6 遗传抗性位点的展望 | 第76页 |
| 5 全文总结 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录：硕士期间论文发表及获奖情况 | 第84页 |
