| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-32页 |
| 2.1 主要仪器设备及耗材 | 第13页 |
| 2.2 主要试剂 | 第13-15页 |
| 2.3 肌纤维分型测定 | 第15-17页 |
| 2.3.1 主要试剂配制 | 第15-16页 |
| 2.3.2 切片样品处理 | 第16页 |
| 2.3.3 切片制作步骤 | 第16-17页 |
| 2.4 猪骨骼肌卫星细胞的分离、培养及鉴定 | 第17-19页 |
| 2.4.1 猪骨骼肌卫星细胞的分离 | 第17-18页 |
| 2.4.2 猪骨骼肌卫星细胞的传代 | 第18页 |
| 2.4.4 猪骨骼肌卫星细胞的鉴定 | 第18-19页 |
| 2.5 猪骨骼肌卫星细胞转染 | 第19页 |
| 2.6 赖氨酸缺失培养基培养猪骨骼肌卫星细胞 | 第19页 |
| 2.7 肌纤维发育相关基因表达测定 | 第19-23页 |
| 2.7.1 引物设计及合成 | 第19-20页 |
| 2.7.2 总RNA提取及纯化 | 第20-21页 |
| 2.7.3 反转录及cDNA鉴定 | 第21-23页 |
| 2.7.4 目的基因mRNA表达丰度检测 | 第23页 |
| 2.8 Western blot | 第23-26页 |
| 2.9 ACO2-TargetN和ACO2-TargetM载体构建 | 第26-31页 |
| 2.9.1 ACO2-TargetN正常序列的获取 | 第26-27页 |
| 2.9.2 PCR扩增片段胶回收 | 第27页 |
| 2.9.3 目的片段与T载体的连接与转化 | 第27-28页 |
| 2.9.4 ACO2-TargetM载体构建 | 第28-29页 |
| 2.9.5 目的片段与T载体的双酶切反应 | 第29页 |
| 2.9.6 目的片段与线性化表达载体pmirGLO的连接 | 第29-30页 |
| 2.9.7 pmirGLO-ACO2-Target重组质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.10 miRNA与荧光素酶报告基因载体共转染 293A细胞 | 第31页 |
| 2.11 荧光素酶检测 | 第31-32页 |
| 2.12 数据处理与统计方法 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-42页 |
| 3.1 不同阶段背最长肌肌纤维类型变化规律 | 第32-33页 |
| 3.2 猪骨骼肌卫星细胞的分离、纯化及鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 骨骼肌卫星细胞的增值曲线 | 第34-35页 |
| 3.4 骨骼肌卫星细胞转染miR-127后对MYH7基因和蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.5 miR-127调控肌纤维类型途径的确定 | 第36-39页 |
| 3.5.1 转染miR-127对肌纤维发育相关基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.5.2 赖氨酸缺失培养基MEF2和MYH7基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.7 pmirGLO-ACO2表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.8 miR-127靶向ACO2的验证 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-47页 |
| 4.1 日龄对肌纤维类型的影响 | 第42-44页 |
| 4.2 miRNAs对骨骼肌发育相关通路的影响 | 第44-45页 |
| 4.3 miR-127靶向抑制ACO2基因及其作用通路 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
