| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-7页 |
| 1 综述 | 第7-20页 |
| 1.1 Bcl-2 家族蛋白调控内源凋亡通路 | 第7-10页 |
| 1.1.1 细胞凋亡主要的两种途径 | 第7-8页 |
| 1.1.2 Bcl-2 家族蛋白调控细胞凋亡 | 第8-10页 |
| 1.2 Bcl-2 家族蛋白抑制剂类靶向抗癌药 | 第10-12页 |
| 1.3 磷酸化修饰的Bcl-2 成为癌症治疗的新靶点 | 第12-16页 |
| 1.3.1 磷酸化Bcl-2 的功能争议问题 | 第12-14页 |
| 1.3.2 磷酸化Bcl-2 的耐药问题 | 第14-16页 |
| 1.4 包涵体蛋白的纯化 | 第16-18页 |
| 1.5 本研究工作的指导思想与研究目标 | 第18-20页 |
| 2 模拟磷酸化Bcl-2 蛋白突变体EEE-Bcl-2 的表达纯化和活性鉴定 | 第20-34页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料、试剂与仪器 | 第20-23页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.3 实验溶液的配制 | 第21-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.3.1 质粒载体转化 | 第23-24页 |
| 2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| 2.3.4 包涵体蛋白的分离和纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.5 包涵体蛋白的变性与蛋白重新折叠 | 第25页 |
| 2.3.6 重组蛋白的纯化及蛋白溶液条件的优化 | 第25-26页 |
| 2.3.7 圆二色光谱 | 第26页 |
| 2.3.8 npBcl-2 蛋白的体外磷酸化 | 第26页 |
| 2.3.9 细胞的稳定转染 | 第26-27页 |
| 2.3.10 细胞凋亡分析 | 第27页 |
| 2.3.11 免疫印迹实验 | 第27页 |
| 2.3.12 荧光偏振实验（FP） | 第27页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第27-33页 |
| 2.4.1 重组蛋白EEE-Bcl-2(2-206)的表达纯化 | 第27-30页 |
| 2.4.2 重组蛋白EEE-Bcl-2(2-206)的最佳溶液条件的筛选 | 第30页 |
| 2.4.3 重组蛋白EEE-Bcl-2(2-206)的活性鉴定 | 第30-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 3 EEE-Bcl2EK蛋白结构的多维核磁研究 | 第34-46页 |
| 3.1 引言 | 第34-35页 |
| 3.2 实验材料、试剂与仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第35页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第35页 |
| 3.2.3 实验溶液的配制 | 第35-36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-37页 |
| 3.3.1 二维核磁蛋白样品制备 | 第36页 |
| 3.3.2 三维核磁蛋白样品制备 | 第36页 |
| 3.3.3 包涵体蛋白的分离和纯化 | 第36页 |
| 3.3.4 包涵体蛋白的变性与蛋白的重新折叠 | 第36页 |
| 3.3.5 蛋白的柱上酶切 | 第36-37页 |
| 3.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第37页 |
| 3.3.7 核磁谱图的测定 | 第37页 |
| 3.3.8 npBcl-2 蛋白的体外磷酸化 | 第37页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第37-45页 |
| 3.4.1 EEE-Bcl-2(2-206)蛋白的二维核磁研究 | 第37-38页 |
| 3.4.2 EEE-Bcl2EK蛋白的重新构建和活性鉴定 | 第38-42页 |
| 3.4.3 EEE-Bcl2EK的二维核磁研究 | 第42-44页 |
| 3.4.4 EEE-Bcl2EK的三维核磁研究 | 第44-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-57页 |
