摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第一章 文献综述 | 第10-17页 |
1 前言 | 第10页 |
2 生态学热点问题物种组团 | 第10-11页 |
3 害虫再猖獗研究现状 | 第11-12页 |
3.1 生态再猖獗研究进展 | 第11-12页 |
3.2 生理再猖獗的研究进展 | 第12页 |
4 营养对稻飞虱生殖的影响 | 第12-13页 |
5 高通量转录组学(RNA-seq) | 第13-14页 |
5.1 转录组学研究技术与方法 | 第13页 |
5.2 在昆虫中的应用领域 | 第13-14页 |
6 数字基因表达谱(DGE) | 第14-15页 |
7 RNAi在昆虫学研究中的进展 | 第15-16页 |
8 研究目的及意义 | 第16-17页 |
第二章 井冈霉素处理的褐飞虱表达谱和白背飞虱转录组分析及ATGL基因对褐飞虱生殖的影响 | 第17-38页 |
1 前言 | 第17-18页 |
2 材料和方法 | 第18-28页 |
2.1 供试水稻品种 | 第18页 |
2.2 供试虫源和药剂 | 第18页 |
2.3 药剂处理 | 第18页 |
2.4 褐飞虱数字基因表达(DGE)标签分析 | 第18-20页 |
2.5 白背飞虱转录组分析 | 第20-21页 |
2.6 RNA干扰 | 第21-27页 |
2.6.1 RNA提取和cDNA合成 | 第21-23页 |
2.6.2 设计简并引物、合成中间片段并纯化 | 第23-24页 |
2.6.3 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第24-25页 |
2.6.4 试剂盒合成dsRNA | 第25-26页 |
2.6.5 RNAi | 第26-27页 |
2.7 定量PCR分析 | 第27页 |
2.8 生理生化测定 | 第27-28页 |
2.8.1 脂肪体和卵巢中蛋白质的测定 | 第27页 |
2.8.2 脂肪体和卵巢中可溶性糖的测定 | 第27页 |
2.8.3 体重的测定 | 第27-28页 |
2.8.4 甘油测定 | 第28页 |
2.9 统计分析 | 第28页 |
3 结果 | 第28-35页 |
3.1 差异基因的选取 | 第28-29页 |
3.2 实时荧光定量(qRT-PCR) | 第29-30页 |
3.3 基因沉默对褐飞虱生殖的影响 | 第30-31页 |
3.4 基因沉默对褐飞虱脂肪体和卵巢蛋白质的影响 | 第31-32页 |
3.5 基因沉默对褐飞虱脂肪体和卵巢可溶性糖的影响 | 第32-33页 |
3.6 基因沉默对褐飞虱体重的影响 | 第33-34页 |
3.7 基因沉默对褐飞虱甘油含量的影响 | 第34-35页 |
4 讨论 | 第35-38页 |
第三章 羧酸酯酶前体的克隆及羧酸酯酶前体基因对白背飞虱生殖的影响 | 第38-56页 |
1 前言 | 第38-39页 |
2 材料与方法 | 第39-45页 |
2.1 供试材料 | 第39-40页 |
2.1.1 供试虫源和药剂 | 第39页 |
2.1.2 供试水稻品种 | 第39页 |
2.1.3 供试菌种和质粒 | 第39页 |
2.1.4 引物设计 | 第39-40页 |
2.2 基因克隆方法 | 第40-42页 |
2.2.1 总RNA提取 | 第40页 |
2.2.2 白背飞虱第一链cDNA的合成 | 第40-41页 |
2.2.3 DNA克隆及测序 | 第41页 |
2.2.4 基因cDNA 3'末端的快速扩增 | 第41页 |
2.2.5 基因cDNA 5'末端的快速扩增 | 第41-42页 |
2.2.6 白背飞虱CES基因的生物信息学分析 | 第42页 |
2.3 dsRNA的合成和RNAi | 第42-44页 |
2.3.1 RNA提取和cDNA合成 | 第42页 |
2.3.2 中间片段的合成并纯化 | 第42-43页 |
2.3.3 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第43页 |
2.3.4 试剂盒合成dsRNA | 第43-44页 |
2.3.5 RNAi | 第44页 |
2.4 定量PCR分析 | 第44页 |
2.5 生理生化测定 | 第44-45页 |
2.5.1 卵巢中蛋白质的测定 | 第44页 |
2.5.2 卵巢中可溶性糖的测定 | 第44页 |
2.5.3 体重的测定 | 第44-45页 |
2.6 统计分析 | 第45页 |
3 结果 | 第45-54页 |
3.1 基因克隆结果 | 第45-50页 |
3.1.1 白背飞虱总RNA提取 | 第45页 |
3.1.2 白背飞虱CES基因中间片段的扩增 | 第45-46页 |
3.1.3 白背飞虱CES基因的cDNA 3'末端的快速扩增 | 第46-47页 |
3.1.4 白背飞虱CES基因的cDNA 5'末端的快速扩增 | 第47-49页 |
3.1.5 CES基因氨基酸序列的BlastP分析 | 第49-50页 |
3.2 实时荧光定量(qRT-PCR) | 第50-51页 |
3.3 敲除CES对白背飞虱生殖的影响 | 第51-52页 |
3.4 基因敲除对白背飞虱生理生化的影响 | 第52-54页 |
3.4.1 基因敲除对白背飞虱卵巢蛋白质的影响 | 第52页 |
3.4.2 基因敲除对白背飞虱卵巢可溶性糖的影响 | 第52-53页 |
3.4.3 基因敲除对白背飞虱体重的影响 | 第53-54页 |
4 讨论 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |