| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 昆虫胆固醇及其转运蛋白 | 第13-15页 |
| 1.1.1 胆固醇在昆虫中的作用 | 第13页 |
| 1.1.2 胆固醇的合成和运输 | 第13-14页 |
| 1.1.3 昆虫胆固醇转运相关蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2 SCP-2基因结构及表达调控 | 第15-18页 |
| 1.2.1 SCP-2基因的结构和蛋白表达 | 第15-16页 |
| 1.2.2 SCP-2基因启动子及表达调控 | 第16-17页 |
| 1.2.3 调控昆虫脂代谢的转录因子 | 第17-18页 |
| 1.3 SCP-2蛋白的结构与功能 | 第18-22页 |
| 1.3.1 SCP-2蛋白结构域 | 第18-20页 |
| 1.3.2 SCP-2蛋白和底物的结合 | 第20-21页 |
| 1.3.3 SCP-2功能位点研究 | 第21页 |
| 1.3.4 昆虫SCP-2抑制剂研究 | 第21-22页 |
| 1.4 立题背景和意义 | 第22-24页 |
| 2. HaSCP-2蛋白NMR结构解析 | 第24-50页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.3 试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 基本实验操作 | 第26页 |
| 2.2.2 HaSCP-2重组表达质粒构建 | 第26-27页 |
| 2.2.3 蛋白表达和纯化 | 第27页 |
| 2.2.4 蛋白同位素标记 | 第27-28页 |
| 2.2.5 NMR数据采集和分析 | 第28页 |
| 2.2.6 HaSCP-2蛋白的相似性比较和配体结合位点分析 | 第28-29页 |
| 2.3 结果和分析 | 第29-47页 |
| 2.3.1 HaSCP-2的基因克隆和表达载体构建 | 第29页 |
| 2.3.2 HaSCP-2及trHaSCP-2蛋白诱导表达 | 第29-31页 |
| 2.3.3 HaSCP-2蛋白的截短优化 | 第31-36页 |
| 2.3.4 trHaSCP-2蛋白NMR体系优化 | 第36-40页 |
| 2.3.5 HaSCP-2蛋白NMR结构 | 第40-47页 |
| 2.4 讨论和结论 | 第47-50页 |
| 2.4.1 讨论 | 第47-49页 |
| 2.4.2 结论 | 第49-50页 |
| 3. HaSCP-2蛋白的功能位点分析及生物活性测定 | 第50-68页 |
| 3.1 材料 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.2.1 HaSCP-2蛋白和胆固醇的结合活性测定 | 第51页 |
| 3.2.2 计算机模拟对接分析 | 第51-52页 |
| 3.2.3 蛋白点突变分析 | 第52页 |
| 3.2.4 抑制剂与trHaSCP-2竞争性结合测定 | 第52-53页 |
| 3.2.5 昆虫脂肪体胆固醇含量测定 | 第53页 |
| 3.2.6 统计分析 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-65页 |
| 3.3.1 HaCP-2与NBD-胆固醇的结合 | 第54-55页 |
| 3.3.2 计算机模拟分子对接 | 第55-59页 |
| 3.3.3 trHaSCP-2突变体与NBD-cholesterol的结合 | 第59-62页 |
| 3.3.4 抑制剂与HaSCP-2的竞争性结合 | 第62-63页 |
| 3.3.5 抑制剂对昆虫脂肪体中胆固醇积累的影响 | 第63-65页 |
| 3.4 讨论和结论 | 第65-68页 |
| 3.4.1 讨论 | 第65-66页 |
| 3.4.2 结论 | 第66-68页 |
| 4. 棉铃虫HaSCP-X/SCP-2基因启动子的克隆和活性分析 | 第68-90页 |
| 4.1 材料 | 第68-70页 |
| 4.1.1 实验材料和试剂 | 第68-69页 |
| 4.1.2 实验质粒 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-76页 |
| 4.2.1 基因组DNA提取 | 第70页 |
| 4.2.2 HaSCP-X/SCP-2基因启动子的扩增 | 第70-71页 |
| 4.2.3 启动子转录起始位点分析 | 第71-72页 |
| 4.2.4 启动子活性检测重组载体的构建 | 第72-74页 |
| 4.2.5 启动子突变体检测载体构建 | 第74-75页 |
| 4.2.6 双荧光素酶活性测定 | 第75页 |
| 4.2.7 启动子生物信息学分析 | 第75-76页 |
| 4.3 实验结果 | 第76-87页 |
| 4.3.1 启动子序列扩增 | 第76-78页 |
| 4.3.2 启动子转录起始位点测定 | 第78-80页 |
| 4.3.3 启动子活性分析 | 第80-83页 |
| 4.3.4 启动子生物信息学分析 | 第83-85页 |
| 4.3.5 HaSCP-X启动子-0.4kb区顺式作用元件分析 | 第85-87页 |
| 4.4 讨论和小结 | 第87-90页 |
| 4.4.1 讨论 | 第87-89页 |
| 4.4.2 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 附录 | 第99-103页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
