| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 犬瘟热的概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 流行病学 | 第10-11页 |
| 1.1.2 病原 | 第11页 |
| 1.1.3 犬瘟热H、F、N蛋白及其主要功能特点 | 第11-12页 |
| 1.1.4 发病机理 | 第12页 |
| 1.1.5 临床症状 | 第12-13页 |
| 1.1.6 病理变化 | 第13页 |
| 1.1.7 诊断与防治 | 第13页 |
| 1.1.8 犬瘟热的治疗现状及发展趋势 | 第13-14页 |
| 1.2 单域抗体 | 第14-15页 |
| 1.2.1 抗体 | 第14页 |
| 1.2.2 骆驼抗体 | 第14-15页 |
| 1.3 噬菌体展示技术 | 第15页 |
| 1.4 噬菌体抗体库 | 第15-18页 |
| 1.4.1 噬菌体抗体库的基本原理 | 第16页 |
| 1.4.2 噬菌体抗体库的类型 | 第16-17页 |
| 1.4.3 噬菌体抗体库的特点与优势 | 第17页 |
| 1.4.4 噬菌体抗体库的发展 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 试验一 抗犬瘟热病毒单域抗体库的构建 | 第19-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 PCR引物 | 第19-20页 |
| 2.1.4 培养基和缓冲液的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.5 实验仪器和设备 | 第21页 |
| 2.2 试验内容和方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 骆驼的免疫 | 第21-22页 |
| 2.2.2 血清抗体效价的测定 | 第22页 |
| 2.2.3 采集骆驼全血 | 第22页 |
| 2.2.4 外周血淋巴细胞分离 | 第22-23页 |
| 2.2.5 提取淋巴细胞总RNA | 第23页 |
| 2.2.6 反转录合成cDNA | 第23-24页 |
| 2.2.7 单域抗体基因的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.8 VHH片段的酶切和纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.9 pCANTAB5E载体的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.10 VHH片段与pCANTAB5E载体连接 | 第27-28页 |
| 2.2.11 电转化感受态大肠杆菌TG1 | 第28-29页 |
| 2.2.12 抗体库的初步鉴定 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-33页 |
| 2.3.1 血清抗体效价ELISA测定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 VHH基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 pCANTAB5E质粒酶切 | 第31-32页 |
| 2.3.4 抗体库的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.5 序列分析 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 3 试验二 犬瘟热病毒H、F、N基因原核表达质粒的构建 | 第36-45页 |
| 3.1 试验材料 | 第36页 |
| 3.1.1 试验试剂 | 第36页 |
| 3.1.2 引物 | 第36页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第36页 |
| 3.2 试验内容和方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 提取RNA | 第36页 |
| 3.2.2 扩增H、F、N基因片段 | 第36-37页 |
| 3.2.3 克隆质粒的构建 | 第37页 |
| 3.2.4 表达质粒的构建 | 第37-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-43页 |
| 3.3.1 H、F、N基因的扩增 | 第40页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.3 重组质粒的酶切 | 第41页 |
| 3.3.4 pET28a质粒酶切 | 第41-42页 |
| 3.3.5 表达质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.6 表达质粒序列测定 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |