| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 酵母表达系统简介 | 第7-11页 |
| 1.1.1 酵母表达系统的发展 | 第7页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表达系统的特点 | 第7-8页 |
| 1.1.3 PAOX1的调控机理研究 | 第8-11页 |
| 1.2 碳源阻遏 | 第11页 |
| 1.3 甘油转运体研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4 gup1和gup2研究现状 | 第13页 |
| 1.5 本课题的目的和意义 | 第13-14页 |
| 1.6 本课题的研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-33页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第15-19页 |
| 2.1.1 菌株质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 工具酶和分子量标准 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要试剂、耗材及试剂盒 | 第16页 |
| 2.1.4 主要仪器及配件 | 第16-17页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第17-18页 |
| 2.1.6 主要培养基 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-33页 |
| 2.2.1 PpGUP1缺陷型菌株（GUP1Δ）的构建 | 第20-24页 |
| 2.2.2 PpGUP1过表达菌株（P. pastoris/pGAPZB+PpGUP1）和缺陷型回补菌株（GUP1Δ/pGAPZB+PpGUP1）的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.3 PpGUP1异源表达菌株的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4 突变体生长曲线的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.5 甘油及甲醇含量的检测 | 第28页 |
| 2.2.6 AOX1蛋白的表达水平及活性检测 | 第28-30页 |
| 2.2.7 实时定量PCR检测基因mRNA表达水平 | 第30-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-51页 |
| 3.1 突变体菌株的构建 | 第33-39页 |
| 3.1.1 PpGUP1缺陷型菌株的构建 | 第33-37页 |
| 3.1.2 PpGUP1过表达菌株的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.3 PpGUP1异源表达 | 第38-39页 |
| 3.1.4 小结 | 第39页 |
| 3.2 毕赤酵母生长特性 | 第39-43页 |
| 3.2.1 生物量分析 | 第39-40页 |
| 3.2.2 甘油利用能力 | 第40-42页 |
| 3.2.3 缺陷型菌株对SDS的敏感性 | 第42-43页 |
| 3.2.4 小结 | 第43页 |
| 3.3 PpGUP1在AOX1启动子碳源代谢中的作用 | 第43-48页 |
| 3.3.1 PpGUP1的敲除抑制细胞代谢甲醇 | 第43-44页 |
| 3.3.2 AOX1表达酶活的定量测定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 AOX1蛋白的SDS、Western bloting检测 | 第45-48页 |
| 3.3.4 小结 | 第48页 |
| 3.4 PpGUP1在aox1表达差异影响发生在转录水平 | 第48-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51页 |
| 展望 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59页 |
