| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| 1.1 大肠杆菌表达外源蛋白研究进展 | 第7-8页 |
| 1.1.1 E.coli蛋白表达系统优缺点及其优化策略 | 第7页 |
| 1.1.2 E.coli表达外源蛋白过程中的细胞自溶现象 | 第7-8页 |
| 1.1.3 E.coli活着但不可培养状态（VBNC）简介 | 第8页 |
| 1.2 E.coli细胞自溶研究进展 | 第8-10页 |
| 1.3 细菌中非编码small RNA的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.3.1 sRNA概述 | 第10-11页 |
| 1.3.2 sRNA调控机制 | 第11-12页 |
| 1.3.3 sRNA在菌种改良中的应用 | 第12-13页 |
| 1.4 普鲁兰酶简介 | 第13页 |
| 1.5 本研究立项依据及主要研究内容 | 第13-16页 |
| 1.5.1 立项依据 | 第13-14页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-26页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 仪器、设备 | 第17页 |
| 2.1.3 试剂 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基 | 第17页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 人工反式编码sRNA（anti-micAs）设计 | 第18页 |
| 2.2.2 表达质粒构建 | 第18-21页 |
| 2.2.3 培养方法 | 第21-22页 |
| 2.2.4 检测光密度值和菌落形成单位 | 第22页 |
| 2.2.5 乙醇胁迫临界浓度的筛选 | 第22页 |
| 2.2.6 总RNA提取和实时定量PCR检测基因表达水平 | 第22-24页 |
| 2.2.7 检测外膜蛋白（OmpA）表达水平 | 第24页 |
| 2.2.8 扫描电镜检测菌体形态 | 第24-25页 |
| 2.2.9 普鲁兰酶活性测定 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-46页 |
| 3.1 过表达sRNA对E.coli影响 | 第26-33页 |
| 3.1.1 基因micA及人工设计bprO和omU碱基序列 | 第26页 |
| 3.1.2 sRNAs表达载体及质粒pUC18构建 | 第26-27页 |
| 3.1.3 过表达sRNA对E.coli生物量和存活力的影响 | 第27-28页 |
| 3.1.4 过表达sRNA对E.coli基因和外膜蛋白表达量影响 | 第28-32页 |
| 3.1.5 过表达sRNA对E.coli菌体形态影响 | 第32-33页 |
| 3.2 过表达anti-micAs对E.coli乙醇胁迫抗性影响 | 第33-40页 |
| 3.2.1 筛选E.coli抗乙醇胁迫临界浓度 | 第33-36页 |
| 3.2.2 乙醇胁迫培养条件下过表达sRNA对E.coli生物量和存活力影响 | 第36-37页 |
| 3.2.3 乙醇胁迫培养条件下过表达sRNA对E.coli基因和蛋白表达量影响 | 第37-39页 |
| 3.2.4 乙醇胁迫培养条件下过表达sRNA对E.coli菌体形态影响 | 第39-40页 |
| 3.3 共表达bprO、omU和pul对普鲁兰酶产量的影响 | 第40-43页 |
| 3.3.1 anti-micAs和pul共表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 测定普鲁兰酶活性标准曲线 | 第41-42页 |
| 3.3.3 测定普鲁兰酶活性 | 第42-43页 |
| 3.4 初步分析sRNA结构与功能的相关性 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
