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水稻类受体胞质激酶STRK1调节盐胁迫的分子遗传及生化分析

摘要第1-7页
Abstract第7-14页
英文缩略词第14-16页
第一章 绪论第16-33页
   ·盐胁迫对植物的影响第16-19页
     ·盐胁迫对植物生长发育的影响第16-17页
     ·盐胁迫对植物细胞膜结构的影响第17页
     ·盐胁迫对植物光合作用和呼吸作用的影响第17-18页
     ·盐胁迫对植物活性氧代谢的影响第18-19页
   ·植物抗盐机理研究第19-25页
     ·离子的选择性吸收、外排和区域化作用第19-21页
     ·渗透调节第21-23页
     ·活性氧清除机制第23-25页
   ·植物类受体胞质激酶(RLCK)的研究概况第25-32页
     ·RLCK的结构第26-27页
     ·RLCK的功能第27-32页
   ·本论文的目的和意义第32-33页
第二章 STRK1转基因植株在盐胁迫下的表型分析第33-51页
   ·材料与方法第33-40页
     ·芯片数据的分析及验证第33页
     ·STRK1过表达载体的构建第33-34页
     ·STRK1干扰载体的构建第34页
     ·DH5α感受态的制备第34-35页
     ·EHA105农杆菌感受态的制备第35页
     ·质粒的提取第35-36页
     ·水稻转化第36页
     ·RNA的提取第36-37页
     ·逆转录合成c DNA第37页
     ·水稻STRK1同源基因的氨基酸序列比对第37页
     ·半定量PCR(RT-PCR)分析第37-38页
     ·实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析第38页
     ·水稻总蛋白的提取与Western blot分析第38页
     ·幼苗期盐胁迫处理第38-39页
     ·叶绿素含量的测定第39页
     ·丙二醛(MDA)含量的测定第39-40页
     ·相对电导率的测定第40页
     ·生殖生长时期盐胁迫处理第40页
     ·农艺性状的考察第40页
   ·结果与分析第40-49页
     ·STRK1转基因植株的筛选与鉴定第40-44页
     ·STRK1转基因幼苗在盐胁迫处理条件下的表型鉴定第44-47页
     ·STRK1转基因植株在生殖生长时期盐胁迫条件下的表型鉴定第47-49页
   ·讨论第49-51页
第三章 STRK1基因表达分析第51-63页
   ·材料与方法第51-53页
     ·棕榈酰化修饰位点突变的引物设计第51页
     ·亚细胞定位载体构建第51页
     ·水稻原生质体制备第51-52页
     ·GUS载体构建第52-53页
     ·水稻转化第53页
     ·GUS组织化学染色第53页
     ·RNA提取和q RT-PCR分析第53页
   ·结果与分析第53-61页
     ·STRK1的生物信息学分析第53-56页
     ·STRK1的亚细胞定位分析第56-58页
     ·STRK1的膜定位对其抗盐胁迫功能的影响第58-60页
     ·STRK1基因在不同组织器官的表达分析第60-61页
     ·STRK1的表达受盐和过氧化氢的诱导第61页
   ·讨论第61-63页
第四章 STRK1与Cat C的相互作用分析第63-78页
   ·材料与方法第63-72页
     ·文库筛选及验证第63-66页
     ·双分子荧光互补实验第66-67页
     ·β-半乳糖苷酶活性分析(CPRG液体显色法)第67-68页
     ·共定位实验第68-69页
     ·Pull-down实验第69-71页
     ·免疫共沉淀(Co-IP)实验第71-72页
   ·结果与分析第72-77页
     ·酵母双杂交和Bi FC分析STRK1与CATs互作第72-75页
     ·STRK1与CATs共定位分析第75-76页
     ·Pull-down和Co-IP验证STRK1与Cat C互作第76-77页
   ·讨论第77-78页
第五章 STRK1磷酸化并激活Cat C的酶活性分析第78-86页
   ·材料与方法第78-80页
     ·原核表达载体构建第78页
     ·融合蛋白的原核表达及纯化第78-79页
     ·体外磷酸化分析第79页
     ·体外Cat C酶活性测定第79页
     ·STRK1-FLAG蛋白的免疫沉淀及体外磷酸化分析第79-80页
     ·植物体过氧化氢酶(CAT)的酶活性及H2O2含量的测定第80页
   ·结果与分析第80-84页
     ·STRK1对Cat C磷酸化分析第80-81页
     ·Na Cl诱导STRK1磷酸化Cat C第81-83页
     ·STRK1转基因水稻中CAT酶活和H_2O_2含量的测定第83-84页
   ·讨论第84-86页
第六章 STRK1转基因植株在氧化胁迫下的表型分析第86-91页
   ·材料与方法第86-87页
     ·甲基紫精(MV)处理STRK1转基因植株第86页
     ·CAT酶活、苗长和叶绿素含量的测定第86页
     ·过氧化氢(H_2O_2)处理STRK1转基因植株第86-87页
     ·3,3’-二氨基联苯胺(DAB)染色第87页
   ·结果与分析第87-89页
     ·鉴定STRK1转基因植株在MV处理下的表型第87-88页
     ·鉴定STRK1转基因植株在H2O2处理下的表型第88-89页
   ·讨论第89-91页
结论第91-93页
参考文献第93-109页
附录A第109-113页
附录B(攻读博士学位期间所发表的学术论文目录)第113-115页
致谢第115页

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