| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-22页 |
| 1 杆状病毒的背景及研究趋势 | 第17-18页 |
| ·杆状病毒的简介 | 第17页 |
| ·杆状病毒基因组简介 | 第17-18页 |
| 2 杆状病毒结构蛋白的研究进展 | 第18-21页 |
| ·多角体相关蛋白 | 第18-19页 |
| ·多角体蛋白 | 第18页 |
| ·多角体膜相关蛋白 | 第18-19页 |
| ·囊膜蛋白 | 第19-20页 |
| ·BV囊膜蛋白 | 第19-20页 |
| ·ODV囊膜蛋白 | 第20页 |
| ·核衣壳结构蛋白 | 第20-21页 |
| ·VP39蛋白 | 第20页 |
| ·Bm61蛋白 | 第20-21页 |
| ·38K蛋白 | 第21页 |
| 3 Bm NPV的概述 | 第21页 |
| 4 Bm NPV p24基因的研究现状 | 第21-22页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第22-25页 |
| 1 研究的主要内容 | 第22-24页 |
| 2 技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 Bmp24基因的生物信息学分析 | 第25-30页 |
| 1 工具 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-29页 |
| ·Bmp24基因序列 | 第25-26页 |
| ·信号肽分析 | 第26-27页 |
| ·Bm P24疏水性预测 | 第27页 |
| ·跨膜区分析 | 第27-28页 |
| ·二级结构预测 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 Bmp24缺失型和补回型病毒的构建 | 第30-41页 |
| 1 材料与试剂 | 第30-31页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·试剂的配置 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-37页 |
| ·敲除Bm NPV中的Bmp24 | 第31-33页 |
| ·实验策略 | 第31页 |
| ·打靶片段的制备 | 第31-32页 |
| ·纯化回收打靶片段 | 第32页 |
| ·制备DH10Bac菌株的感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·Red重组反应 | 第33页 |
| ·Bmp24-ko-Bacmid的鉴定 | 第33页 |
| ·构建转移载体p Fast Bac HTB-p24 | 第33-35页 |
| ·提取wt Bacmid基因组 | 第33-34页 |
| ·Bmp24基因的扩增 | 第34-35页 |
| ·p Fast Bac HTB质粒提取 | 第35页 |
| ·双酶切 | 第35页 |
| ·p Fast Bac HTB和Bmp24片段连接 | 第35页 |
| ·Bmp24补回型病毒的构建 | 第35-37页 |
| ·构建思路 | 第35-36页 |
| ·制备Bmp24-ko-Bacmid感受态细胞 | 第36页 |
| ·p Fast Bac HTB-p24连接产物的转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第36-37页 |
| ·Bmp24-re-Bacmid的鉴定 | 第37页 |
| 3 结果分析 | 第37-40页 |
| ·打靶片段的制备 | 第37-38页 |
| ·Bmp24缺失型病毒的鉴定 | 第38页 |
| ·p Fast Bac HTB-p24重组质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·Bmp24补回型病毒的鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第五章 Bmp24缺失对子代病毒滴度及包装的影响 | 第41-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·试剂配置 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-44页 |
| ·细胞培养 | 第41-42页 |
| ·提取三种病毒基因组DNA | 第42页 |
| ·转染细胞 | 第42-43页 |
| ·TCID50法测定滴度 | 第43页 |
| ·电镜分析 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-45页 |
| ·病毒增殖曲线分析 | 第44页 |
| ·电镜结果分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第六章 Bmp24缺失对Bm NPV基因组复制及转录水平的影响 | 第47-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第47页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-52页 |
| ·细胞培养 | 第47页 |
| ·提取三种病毒基因组DNA | 第47-48页 |
| ·转染细胞 | 第48页 |
| ·细胞中总基因组DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·提取基因组DNA | 第48页 |
| ·甲基酶消化 | 第48-49页 |
| ·q PCR分析 | 第49-50页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第49页 |
| ·q PCR反应 | 第49-50页 |
| ·提取细胞的总RNA | 第50-51页 |
| ·提取总RNA | 第50页 |
| ·DNase I消化 | 第50-51页 |
| ·逆转录 | 第51页 |
| ·q PCR分析 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·q PCR反应 | 第51-52页 |
| 3.结果 | 第52-57页 |
| ·病毒基因组复制水平的变化 | 第52-54页 |
| ·标准曲线 | 第52-53页 |
| ·病毒基因组DNA复制水平变化分析 | 第53-54页 |
| ·Bmp24缺失对基因组转录水平的影响 | 第54-57页 |
| ·lef-3 转录水平分析 | 第54-55页 |
| ·vp39转录水平分析 | 第55-56页 |
| ·p10转录水平分析 | 第56-57页 |
| 4.讨论 | 第57-58页 |
| 第七章 Bmp24的克隆、表达及融合蛋白的纯化 | 第58-66页 |
| 1 材料与试剂 | 第58页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-63页 |
| ·p ET-28a-Bmp24重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| ·PCR扩增Bmp24全ORF | 第58-59页 |
| ·PCR产物纯化 | 第59页 |
| ·TG1感受态制备 | 第59页 |
| ·p MD-18T-Bmp24构建 | 第59页 |
| ·表达菌BL-21（star）感受态制备 | 第59-60页 |
| ·p ET-28a（+）-Bmp24的构建 | 第60页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第60-61页 |
| ·诱导步骤 | 第60页 |
| ·大量表达 | 第60-61页 |
| ·His柱亲和层析纯化融合蛋白 | 第61-62页 |
| ·目的蛋白洗脱浓度的探索 | 第61页 |
| ·蛋白样品镍柱纯化 | 第61-62页 |
| ·纯化后的融合蛋白透析除盐 | 第62页 |
| ·透析袋预处理 | 第62页 |
| ·透析 | 第62页 |
| ·Western-Blot鉴定 | 第62-63页 |
| ·转膜 | 第62-63页 |
| ·转膜后处理 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-65页 |
| ·p ET-28a-Bmp24重组质粒构建 | 第63-64页 |
| ·诱导表达及纯化Bm P24蛋白 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 第八章 多克隆抗体的制备和Bm P24表达时相的分析 | 第66-70页 |
| 1 材料与试剂 | 第66页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-68页 |
| ·BCA法定量蛋白 | 第66-67页 |
| ·免疫新西兰大白兔 | 第67页 |
| ·制备血清 | 第67页 |
| ·抗体效价测定（ELISA法） | 第67-68页 |
| ·Western-Blot鉴定Bm P24表达时相 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-69页 |
| ·BCA蛋白定量 | 第68页 |
| ·ELISA血清抗体效价测定 | 第68-69页 |
| ·Bm P24蛋白表达时相 | 第69页 |
| 4.讨论 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
