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stil基因在PC12细胞和斑马鱼视网膜细胞增殖中的作用及斑马鱼帕金森疾病模型的建立

摘要第1-7页
Abstract第7-14页
第一章 前言第14-38页
 第一节 斑马鱼一新型的模式生物第14-17页
     ·斑马鱼概述第14页
     ·斑马鱼作为模式生物的优点第14-17页
 第二节 斑马鱼是研究组织和器官再生的动物模型第17-21页
     ·再生概述第17页
     ·斑马鱼作为研究再生模式生物的优点第17-18页
     ·再生在斑马鱼上的研究进展第18-21页
 第三节 斑马鱼是研究神经退行性疾病的模型第21-24页
     ·神经退行性疾病概述第21页
     ·斑马鱼在神经退行性疾病研究中的进展第21-24页
 第四节 PC12细胞—神经细胞模型第24-26页
     ·PC12细胞概述第24页
     ·PC12细胞的研究进展第24-26页
 第五节 Stil基因的研究进展第26-31页
     ·Stil基因概述第26-27页
     ·Stil基因的研究进展第27-31页
 第六节 与再生和增殖相关的信号通路第31-38页
     ·Wnt信号通路第31-32页
     ·Shh信号通路第32-33页
     ·PI3K/AKT信号通路第33-34页
     ·FGF信号通路第34页
     ·TGF-β信号通路第34-36页
     ·ERK信号通路第36-38页
第二章 Stil基因能够调控PC12神经肿瘤细胞的增殖第38-62页
 第一节 材料和方法第38-50页
     ·实验对象第38页
     ·主要试剂第38-39页
     ·主要仪器第39页
     ·Stil基因过表达载体pcDNA3.1(-)-Stil的构建第39-42页
     ·质粒大量提取第42-43页
     ·细胞转染第43-44页
     ·细胞免疫荧光第44-45页
     ·细胞增殖实验cck-8第45页
     ·免疫共沉淀第45-46页
     ·细胞全蛋白的蛋白提取及定量第46-47页
     ·SDS-PAGE及western blot第47-48页
     ·细胞RNA的提取以及cDNA的合成第48-49页
     ·Real-time PCR第49-50页
     ·统计学分析第50页
 第二节 实验结果与分析第50-57页
     ·Stil基因的PCR结果第50-51页
     ·测序结果第51页
     ·转染效果第51-52页
     ·STIL蛋白同时存在细胞质和细胞核内第52-53页
     ·不同血清浓度影响STIL和PCNA蛋白的表达第53-54页
     ·在PC12细胞中STIL可以与SUFU、GLI1相互作用第54页
     ·沉默Stil基因引起PC12细胞增殖减慢第54-55页
     ·过表达Stil基因促进PC12细胞增殖第55-57页
 第三节 实验讨论与总结第57-61页
 第四节 实验结论与展望第61-62页
第三章 Stil基因对于成年斑马鱼视网膜中多巴胺能细胞的增殖是必需的第62-74页
 第一节 实验材料与方法第62-66页
     ·实验动物第62页
     ·主要试剂第62-63页
     ·主要仪器第63页
     ·显微注射第63-64页
     ·斑马鱼眼球和视网膜的剥离第64页
     ·冰冻切片第64页
     ·冰冻切片的免疫组化第64-65页
     ·RNA提取第65-66页
     ·Real-time PCR第66页
     ·视网膜蛋白的提取和western检测第66页
     ·统计学分析第66页
 第二节 实验结果及分析第66-71页
     ·野生型斑马鱼视网膜6-OHDA处理后细胞增殖趋势第66-67页
     ·Stil和Gli1基因在斑马鱼恢复过程中有波动性的表达第67-68页
     ·在6dpi时野生型斑马鱼和nbb+/-突变体细胞增殖和基因表达情况第68-69页
     ·cyclopamine处理野生型斑马鱼视网膜导致细胞的增殖减慢第69-70页
     ·在nbb+/-鱼视网膜中沉默sufu基因对gli1表达和细胞增殖的影响第70-71页
 第三节 实验讨论与总结第71-72页
 第四节 实验结论与展望第72-74页
第四章 斑马鱼帕金森氏病模型的建立第74-82页
 第一节 实验材料与方法第74-77页
     ·实验动物第74页
     ·主要试剂第74页
     ·主要仪器第74-75页
     ·眼内注射第75页
     ·行为学实验第75-76页
     ·蛋白印迹检测注射后斑马鱼视网膜内TH蛋白的表达第76页
     ·视网膜整体免疫组化第76页
     ·视网膜冰冻切片免疫组化第76页
     ·统计学分析第76-77页
 第二节 实验结果与分析第77-79页
     ·6-OHDA对斑马鱼运动能力的影响第77-78页
     ·注射6-OHDA的斑马鱼视网膜内TH蛋白的含量明显减少第78页
     ·注射6-OHDA斑马鱼的视网膜内多巴胺能细胞明显减少第78-79页
 第三节 实验讨论与总结第79-80页
 第四节 实验结论与展望第80-82页
结论第82-83页
附录 综述第83-88页
 参考文献第86-88页
参考文献第88-95页
致谢第95-96页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第96页

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