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三孢布拉氏霉菌对三孢酸响应机制的研究

学位论文数据集第1-4页
摘要第4-6页
ABSTRACT第6-18页
英文名词縮写表第18-19页
第一章 绪论第19-33页
   ·引言第19页
   ·类胡萝卜素简介第19-25页
     ·类胡萝卜素的种类和作用第19-20页
     ·类胡萝卜素在真菌中的生物合成途径第20-22页
     ·三孢酸促进毛霉目真菌类胡萝卜素合成素第22-24页
       ·三孢酸简介第22-23页
       ·三孢酸的合成过程第23-24页
       ·三孢酸结构类似物第24页
     ·(+)、(-)菌接合对基因转录水平的影响第24-25页
   ·真菌中次生代谢产物的合成与调控第25-26页
   ·蛋白质组学与代谢组学技术概况第26-31页
     ·组学概论第26页
     ·基于凝胶电泳的蛋白质组学分析技术第26-27页
       ·二维电泳的样品制备技术第27页
       ·二维电泳技术所面临的技术障碍第27页
     ·代谢组学概述第27-31页
       ·代谢组样品制备方法第29-30页
       ·代谢组样品检测方法第30页
       ·代谢组学的数据分析方法第30-31页
   ·立题目的及意义第31页
   ·本论文研究内容第31-33页
第二章 三孢酸的分离纯化及其对三孢布拉氏霉菌菇类合成的影响第33-41页
   ·前言第33页
   ·材料与方法第33-36页
     ·菌种和培养基第33页
     ·主要试剂及仪器第33-34页
     ·实验方法第34-36页
       ·孢子的收集第34页
       ·孢子的定量第34页
       ·三孢酸的分离和鉴定第34-35页
       ·萜类物质含量的测定第35-36页
       ·统计分析第36页
   ·结果与讨论第36-40页
     ·三孢酸的分离第36-37页
     ·三孢酸的最适添加时间和添加量的摸索第37-38页
     ·三孢酸对β-胡萝卜素、泛醌和麦角固醇含量的影响第38-40页
   ·小结第40-41页
第三章 三孢布拉霉在代谢水平对三孢酸的响应第41-54页
   ·前言第41页
   ·材料与方法第41-43页
     ·菌种和培养基第41页
     ·主要试剂及仪器第41页
     ·实验方法第41-43页
       ·样品采集,灭活,胞内代谢物提取第42页
       ·样品衍生化第42页
       ·GC-MS条件设置第42-43页
       ·多维数据分析第43页
       ·差异代谢物相关性分析第43页
   ·结果与讨论第43-53页
     ·三孢酸处理产生的差异代谢物第43-49页
     ·差异代谢物的聚类分析和相关性分析第49-50页
     ·三孢酸对类胡萝卜素和脂肪酸代谢的影响第50-51页
     ·三孢酸对碳水化合物代谢的影响第51页
     ·三孢酸对氨基酸代谢的影响第51-53页
   ·小结第53-54页
第四章 三孢布拉霉在蛋白水平对三孢酸的响应第54-70页
   ·前言第54页
   ·材料与方法第54-60页
     ·菌种和培养基第54页
     ·主要试剂及仪器第54-55页
     ·实验方法第55-60页
       ·总蛋白质提取第55页
       ·二维电泳第55-56页
       ·染色第56页
       ·凝胶图像分析第56页
       ·差异蛋白鉴定第56-57页
       ·差异蛋白的编码基因EST序列的克隆第57-59页
       ·荧光定量PCR第59-60页
   ·结果与讨论第60-68页
     ·总蛋白提取方法的选择第60-61页
     ·胶条pH范围的选择第61页
     ·水化液的选择第61-62页
     ·胶浓度的选择第62页
     ·三孢酸对三孢布拉氏霉菌蛋白表达的影响第62-68页
   ·小结第68-70页
第五章 三孢酸对三孢布拉霉类胡萝卜素合成转录水平的调节第70-79页
   ·前言第70页
   ·材料与方法第70-73页
     ·菌种和培养基第70页
     ·主要试剂及仪器第70页
     ·实验方法第70-73页
       ·RNA提取与反转录第70-71页
       ·ipi,carG,coq2和erg9 EST序列引物设计第71页
       ·PCR条件第71页
       ·EST序列的确认第71页
       ·荧光定量引物设计第71-72页
       ·荧光定量PCR反应条件第72-73页
   ·结果与讨论第73-78页
     ·ipi、carG、coq2和erg9 EST序列的克隆第73页
     ·萜类生物合成基因的定量PCR第73-78页
       ·ipi、carG、carRA和carB转录物的定量分析第77页
       ·hmgR、isoA、coq2和erg9转录物的定量分析第77-78页
   ·小结第78-79页
第六章 受三孢酸调控的基因及其启动子的克隆与分析第79-90页
   ·前言第79页
   ·材料与方法第79-83页
     ·菌种及质粒第79页
     ·主要试剂及仪器第79-80页
     ·实验方法第80-83页
       ·聚类分析第80页
       ·5'-RACE第80页
       ·3'-RACE第80-81页
       ·ipi和carG在E.coli中的表达第81页
       ·β-胡萝卜素的提取和含量测定第81页
       ·启动子克隆第81-82页
       ·生物信息学分析第82-83页
   ·结果与讨论第83-88页
     ·聚类分析第83-84页
     ·ipi和carG的全长cDNA克隆第84页
     ·生物信息学分析第84-85页
     ·三孢布拉氏霉菌的IPI和GGPS的功能表达第85-87页
     ·ipi和carG的启动子分析第87-88页
   ·小结第88-90页
第七章 结论与展望第90-93页
参考文献第93-99页
附录1 三孢酸影响三孢布拉氏霉菌的蛋白质磷酸化水平第99-107页
附录2 三孢酸对转录因子与Ste11和Mot3结合位点结合的影响第107-113页
附录3 CarRA-B、carG和ipi的启动子片段第113-115页
致谢第115-116页
研究成果及发表的学术论文第116-117页
作者和导师简介第117页

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