| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| ·ROS 和NADPH 氧化酶 | 第9-11页 |
| ·动物细胞中的NADPH 氧化酶 | 第10页 |
| ·植物细胞中的NADPH 氧化酶 | 第10-11页 |
| ·真菌中的NADPH 氧化酶 | 第11页 |
| ·丝状真菌基因功能的研究方法 | 第11-12页 |
| ·转座子标签技术 | 第11-12页 |
| ·基因敲除 | 第12页 |
| ·超表达 | 第12页 |
| ·RNA 干扰 | 第12页 |
| ·其它方法 | 第12页 |
| ·RNA 干扰 | 第12-15页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第13-14页 |
| ·siRNAs 的制备方法 | 第14页 |
| ·RNAi 技术的应用 | 第14页 |
| ·RNAi 与真菌 | 第14-15页 |
| ·真菌的遗传转化方法 | 第15-17页 |
| ·PEG-CaCl_2介导的原生质体转化 | 第15页 |
| ·电击转化法 | 第15页 |
| ·限制性内切酶介导的真菌遗传转化 | 第15页 |
| ·农杆菌介导的真菌遗传转化系统 | 第15-16页 |
| ·基因枪法 | 第16-17页 |
| 第二章 平菇中NADPH oxidase 基因noxA 的克隆 | 第17-24页 |
| ·材料与方法 | 第17-18页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-21页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·平菇基因组总RNA 提取 | 第18页 |
| ·CDNA 第一条链的合成 | 第18页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第18-19页 |
| ·PCR 产物回收纯化 | 第19-20页 |
| ·PCR 回收产物与pMD19-T 克隆载体连接 | 第20页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第20页 |
| ·重组质粒提取及鉴定 | 第20-21页 |
| ·DNA 序列测定及分析 | 第21页 |
| ·结果与分析 | 第21-23页 |
| ·RNA 的质量检测 | 第21页 |
| ·平菇NOXA 基因的克隆与序列分析 | 第21-23页 |
| ·本章小结 | 第23-24页 |
| 第三章 RNAi 真核表达载体 NOXA-P8 的构建 | 第24-32页 |
| ·材料与方法 | 第24-25页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·真核表达载体NOXA-P8 构建示意图 | 第25页 |
| ·NOXA 基因真核表达载体 NOXA-P8 的构建 | 第25-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·正向和反向序列的PCR 扩增检测结果 | 第28-29页 |
| ·重组质粒T-4 和T-3 酶切验证结果 | 第29页 |
| ·重组质粒NOXA-T8 的酶切验证 | 第29-30页 |
| ·重组质粒NOXA-P8 和 PAN7-1 酶切验证 | 第30-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 第四章 平菇的遗传转化 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第32页 |
| ·培养基配方 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要溶液配制 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·原生质体的制备与再生 | 第33页 |
| ·PEG-CaCl_2介导的原生质体转化 | 第33-34页 |
| ·转化子的筛选和鉴定 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-42页 |
| ·原生质体的制备 | 第35-36页 |
| ·原生质体的再生 | 第36页 |
| ·平菇原生质体转化 | 第36页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第36-39页 |
| ·生长速度测定结果 | 第39-41页 |
| ·转化子的氮蓝四唑NBT 染色结果 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第五章 讨论 | 第43-44页 |
| ·丝状真菌中存在NADPH oxidase 氧化酶noxA 基因 | 第43页 |
| ·RNAi 在真菌基因功能研究中的应用 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 英文摘要 | 第49-50页 |
