| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 概述 | 第11-20页 |
| ·双孢蘑菇研究现状和存在问题 | 第11页 |
| ·双孢蘑菇覆土出菇机理的研究现状 | 第11-13页 |
| ·荧光假单胞菌 | 第13-14页 |
| ·ACC 脱氨酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·ACC 脱氨酶特征 | 第14-15页 |
| ·ACC 脱氨酶的作用机理 | 第15-16页 |
| ·食用菌遗传转化研究进展 | 第16-19页 |
| ·PEG 介导的原生质体转化法 | 第16-17页 |
| ·电激转化法 | 第17页 |
| ·基因枪法 | 第17-18页 |
| ·限制性内切酶介导的DNA 整合法 | 第18页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第18-19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 恶臭假单胞菌对双孢蘑菇平板培养菌丝生理活性的影响 | 第20-29页 |
| 1 材料和方法 | 第20-23页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-23页 |
| ·检测恶臭假单胞菌及其突变株是否具ACC 脱氨酶活性 | 第21页 |
| ·菌丝生长速度测定 | 第21页 |
| ·菌丝长度和直径测定 | 第21页 |
| ·菌丝干重 | 第21-22页 |
| ·菌丝乙烯含量的测定 | 第22页 |
| ·菌丝体上菌膜的观测 | 第22-23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-28页 |
| ·供试菌的ACC 脱氨酶活性检测 | 第23页 |
| ·菌丝生长速度测定 | 第23-25页 |
| ·恶臭假单胞菌及ACC 脱氨酶突变株接种量对双孢蘑菇菌丝生长的影响 | 第23-24页 |
| ·不同处理对双孢菇菌丝生长的影响 | 第24-25页 |
| ·菌丝分支长度和直径测定 | 第25-26页 |
| ·菌丝干重的测定 | 第26-27页 |
| ·乙烯含量 | 第27-28页 |
| ·菌膜的测定 | 第28页 |
| 3 本章小结 | 第28-29页 |
| 第三章 恶臭假单胞菌对双孢蘑菇试管培养菌丝生理活性的影响 | 第29-36页 |
| 1 材料和方法 | 第29-32页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·培养料 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·菌丝生长速度测定 | 第29-30页 |
| ·乙烯含量的测定 | 第30页 |
| ·ACC 含量的测定方法 | 第30-31页 |
| ·菌丝体菌膜的观测 | 第31-32页 |
| ·漆酶活性的测定 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·菌丝生长速度 | 第32-33页 |
| ·菌丝乙烯含量的测定和ACC 含量测定 | 第33-34页 |
| ·菌膜的观测 | 第34页 |
| ·漆酶活性的测定 | 第34-35页 |
| 3 本章小结 | 第35-36页 |
| 第四章 恶臭假单胞菌对双孢蘑菇子实体形成的影响 | 第36-41页 |
| 1 实验材料 | 第36页 |
| ·供试菌株 | 第36页 |
| ·培养料 | 第36页 |
| ·栽培地点 | 第36页 |
| 2 试验方法 | 第36-37页 |
| ·蘑菇出菇 | 第36-37页 |
| ·原种制作 | 第36页 |
| ·栽培料制作方法 | 第36页 |
| ·播种 | 第36页 |
| ·蘑菇出菇管理 | 第36页 |
| ·播种后到出菇前的管理 | 第36-37页 |
| ·覆土与管理 | 第37页 |
| ·出菇管理 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-39页 |
| ·恶臭假单胞菌对双孢蘑菇出菇的影响 | 第37页 |
| ·双孢蘑菇栽培试验灭菌覆土中添加恶臭假单胞菌对出菇的影响 | 第37-39页 |
| 4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第五章 恶臭假单胞菌ACC 脱氨酶基因的克隆和GPD 启动子片段的获取 | 第41-55页 |
| 1 材料和方法 | 第41-47页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌种和质粒 | 第41页 |
| ·培养基配方 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·溶液配制 | 第41-42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·Acds 片段获取 | 第42-45页 |
| ·Acds 功能基因的验证 | 第45页 |
| ·GPD 启动子获取 | 第45-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-53页 |
| ·Acds 片段扩增 | 第47页 |
| ·Acds 测序比对结果 | 第47-50页 |
| ·Acds 功能基因的验证 | 第50页 |
| ·双酶切验证 | 第50页 |
| ·α-丁酮酸含量的测定 | 第50页 |
| ·GPD 启动子检测 | 第50-53页 |
| ·GPD 启动子的扩增 | 第50-51页 |
| ·GPD 启动子测序结果比对 | 第51-53页 |
| 3 本章小结 | 第53-55页 |
| 第六章 双孢蘑菇外源基因表达载体的构建及转化体系的研究 | 第55-64页 |
| 1 实验材料 | 第55-56页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第55页 |
| ·培养基配方 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-60页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第56页 |
| ·酶切反应 | 第56页 |
| ·目的片段回收及转化 | 第56页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第56-57页 |
| ·载体构建的技术路线 | 第57-58页 |
| ·双孢蘑菇外植体的准备 | 第58页 |
| ·微弹的制备 | 第58页 |
| ·质粒PAN7-1 和PAN7-Acds 的提取及纯化 | 第58-59页 |
| ·质粒宿主菌的活化与培养 | 第58-59页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第59页 |
| ·质粒DNA 的纯化 | 第59页 |
| ·基因枪转化 | 第59页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第59页 |
| ·双孢蘑菇菌丝体的潮霉素抗性的敏感性测验 | 第59-60页 |
| ·培养基的配制 | 第59页 |
| ·双孢蘑菇菌丝体的潮霉素抗性 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·重组子的PCR 验证 | 第60页 |
| ·双孢蘑菇菌丝体的潮霉素抗性的敏感性测验 | 第60-61页 |
| ·双孢蘑菇含潮霉素抗性转化子的筛选 | 第61-63页 |
| ·含潮霉素抗性拟转化子的初筛 | 第61页 |
| ·含潮霉素抗性转化子的复筛 | 第61-62页 |
| ·PCR 鉴定含潮霉素抗性的阳性转化子 | 第62页 |
| ·抗性转化子的遗传稳定性分析 | 第62-63页 |
| 4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第七章 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| Abstract | 第73-74页 |
