| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| ·磷脂酶 | 第14-16页 |
| ·磷脂酶的生理功能 | 第14页 |
| ·磷脂酶的工业应用 | 第14-16页 |
| ·磷脂酶A1 | 第16-21页 |
| ·动物磷脂酶A1 | 第16页 |
| ·植物磷脂酶A1 | 第16-17页 |
| ·细菌磷脂酶A1 | 第17-18页 |
| ·细菌磷脂酶A与致病性 | 第18-19页 |
| ·革兰氏阴性菌外膜磷脂酶A结构与作用机制 | 第19-20页 |
| ·磷脂酶A1的分子生物学研究进展 | 第20-21页 |
| ·研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 磷脂酶A1基因克隆及生物信息学分析 | 第23-38页 |
| ·实验材料与仪器 | 第23-27页 |
| ·菌株及质粒 | 第23页 |
| ·实验药品及仪器 | 第23-25页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·粘质沙雷氏菌基因组提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增基因plaA、plaB及plaS | 第28-29页 |
| ·pUC19质粒提取 | 第29页 |
| ·PCR产物和质粒双酶切 | 第29-30页 |
| ·目的基因和载体连接 | 第30页 |
| ·重组质粒的转化(CaCl_2) | 第30-31页 |
| ·重组阳性克隆的筛选和鉴定 | 第31页 |
| ·目的基因生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-37页 |
| ·目的基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·生物信息学分析 | 第33-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 磷脂酶A1基因的大肠杆菌表达 | 第38-56页 |
| ·实验材料与仪器 | 第38-40页 |
| ·菌株和仪器 | 第38页 |
| ·培养基和试剂 | 第38-40页 |
| ·实验方法 | 第40-46页 |
| ·表达菌株的构建 | 第40页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件优化 | 第42-43页 |
| ·磷脂酶A1酶活的测定 | 第43-44页 |
| ·酶反应条件优化 | 第44页 |
| ·重组菌株生长情况测定 | 第44页 |
| ·菌体超声波破碎 | 第44页 |
| ·包涵体变复性 | 第44-45页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-54页 |
| ·表达菌株的构建 | 第46页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE结果分析 | 第46-47页 |
| ·AP28诱导表达条件优化 | 第47-50页 |
| ·酶反应最佳条件的优化 | 第50-51页 |
| ·诱导条件下重组菌的酶活和生长 | 第51-53页 |
| ·包涵体变复性 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 磷脂酶A1基因在枯草杆菌WB600中的表达 | 第56-66页 |
| ·实验材料与仪器 | 第56-57页 |
| ·菌株和仪器 | 第56页 |
| ·培养基和试剂 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·WB600电转化条件的优化 | 第57-58页 |
| ·表达菌株的构建 | 第58-59页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第59页 |
| ·实验结果 | 第59-63页 |
| ·WB600电转化条件的优化 | 第59-61页 |
| ·表达菌株的构建 | 第61-62页 |
| ·酶活及生长情况分析 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-66页 |
| 第五章 结论与展望 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |