| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| ·重组抗体技术 | 第11-12页 |
| ·单链抗体SCFV | 第12页 |
| ·SCFV 抗体的分型 | 第12-13页 |
| ·SCFV 的表达 | 第13-14页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第14-16页 |
| ·噬菌体展示SCFV的优势 | 第16页 |
| ·应用 | 第16-19页 |
| ·医疗应用 | 第16-17页 |
| ·诊断应用 | 第17-18页 |
| ·scFv 在口蹄疫方面的应用 | 第18-19页 |
| 第二章 口蹄疫病毒单链抗体 CDNAT7 噬菌体展示文库的构建 | 第19-26页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·实验试剂 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19页 |
| ·脾细胞、载体及菌株 | 第19页 |
| ·主要溶液及配制 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-22页 |
| ·抗口蹄疫单链抗体的构建 | 第20-21页 |
| ·连接 scFv 和 T7 噬菌体载体 | 第21页 |
| ·菌体体外包装 | 第21页 |
| ·文库滴度的测定 | 第21页 |
| ·噬菌斑鉴定 | 第21页 |
| ·文库的扩增 | 第21-22页 |
| ·文库筛选 | 第22页 |
| ·插入片段的序列测定 | 第22页 |
| ·实验结果 | 第22-24页 |
| ·scFv 的构建 | 第22-24页 |
| ·T7 噬菌体展示文库的鉴定 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 口蹄疫病毒单链抗体在 CHO 细胞中的瞬时表达 | 第26-36页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·基因、载体和表达细胞 | 第26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·主要溶液及其配置方法 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·目的基因克隆 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物纯化与回收 | 第28页 |
| ·回收产物及真核表达载体的酶切、连接与转化 | 第28页 |
| ·目的基因与真核表达载体的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的大抽提 | 第29-30页 |
| ·CHO 细胞的复苏、培养与冻存 | 第30页 |
| ·CHO 细胞的转染 | 第30-31页 |
| ·目的蛋白的亚细胞定位 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-35页 |
| ·目的基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·重组真核表达质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·质粒 scFv- pEGFP-N1 小量制备的浓度及 OD 值 | 第32-33页 |
| ·CHO 细胞的培养 | 第33页 |
| ·目的蛋白在 CHO 细胞中的表达 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的亚细胞定位 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 口蹄疫病毒单链抗体的可溶性表达及鉴定 | 第36-46页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·实验试剂 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36页 |
| ·载体及宿主细胞 | 第36页 |
| ·主要溶液及配方 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·scFv 基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·scFv 基因片段和载体 pSMK 的酶切 | 第38页 |
| ·scFv 基因片段和载体 pSMK 的连接 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·融合表达载体转入表达菌中 | 第39页 |
| ·16℃大量诱导表达及纯化 | 第39页 |
| ·口蹄疫病毒 scFv 与 FMDV 亲和力和特异性的 ELISA 鉴定 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-44页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·抗口蹄疫病毒 scFv 的表达及纯化 | 第41-43页 |
| ·ELISA 鉴定 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第五章 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
