| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-19页 |
| ·小鹅瘟疫苗的研究进展 | 第13-15页 |
| ·小鹅瘟常规疫苗 | 第13-14页 |
| ·小鹅瘟基因工程疫苗 | 第14-15页 |
| ·腺病毒载体疫苗发展 | 第15页 |
| ·肠道炎症与炎症因子 | 第15-18页 |
| ·肠道炎症 | 第15-16页 |
| ·参与炎症反应的炎症介质 | 第16-18页 |
| ·目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-28页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第19-20页 |
| ·病毒 | 第19页 |
| ·主要载体与菌株 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验动物及分组 | 第20页 |
| ·雏鹅病毒接种及分组 | 第20页 |
| ·免疫小鼠及分组 | 第20页 |
| ·炎症相关基因 mRNA 表达的检测 | 第20-23页 |
| ·总 RNA 提取及反转录 | 第20-21页 |
| ·引物设计与合成 | 第21页 |
| ·普通 PCR 扩增基因 | 第21-22页 |
| ·基因序列测定鉴定 | 第22页 |
| ·实时定量 PCR 扩增 | 第22页 |
| ·融解曲线分析 | 第22页 |
| ·PfaffL 法分析基因表达的相对差异 | 第22-23页 |
| ·小鹅瘟病毒 VP3 基因组克隆 | 第23-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·病毒 DNA 提取 | 第23页 |
| ·目的基因 PCR 扩增及纯化 | 第23页 |
| ·PCR 纯化产物与 PEASY-T1 载体连接 | 第23-24页 |
| ·重组腺病毒穿梭质粒 pShuttle-CMV-VP3 的构建 | 第24页 |
| ·双酶切 VP3 基因和 pShuttle-CMV 质粒载体 | 第24页 |
| ·酶切产物与穿梭质粒连接 | 第24页 |
| ·质粒 DNA 提取 | 第24页 |
| ·重组穿梭质粒 pShuttle-CMV-VP3 的 PCR 鉴定 | 第24页 |
| ·同源重组获得腺病毒质粒 pAD-VP3 | 第24-25页 |
| ·穿梭载体 pShuttle-CMV-VP3 的线性化 | 第24-25页 |
| ·将线性化的穿梭质粒电转化到 BJ5183 感受态细胞 | 第25页 |
| ·质粒 DNA 提取及单酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组腺病毒质粒扩增 | 第25页 |
| ·重组病毒质粒测序鉴定 | 第25页 |
| ·转染 293 细胞包装腺病毒 | 第25-27页 |
| ·293 细胞培养 | 第25-26页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第26页 |
| ·重组腺病毒 pAD-VP3 的传代 | 第26页 |
| ·重组腺病毒 pAD-VP3 的鉴定 | 第26页 |
| ·重组病毒滴度测定 | 第26-27页 |
| ·动物免疫及抗体检测 | 第27页 |
| ·小鼠免疫 | 第27页 |
| ·血清抗体 ELISA 检测 | 第27页 |
| ·试验数据分析与统计 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-37页 |
| ·小鹅瘟病毒感染雏鹅的临床症状与剖检变化 | 第28页 |
| ·小鹅瘟病毒对雏鹅肠道炎症因子 mRNA 表达的检测结果 | 第28-31页 |
| ·实时 PCR 检测方法的建立 | 第28-29页 |
| ·炎症相关基因实时 PCR 扩增结果 | 第29页 |
| ·GPV 对雏鹅肠道 TNF-α和 IL-1β基因 mRNA 表达影响的检测结果 | 第29页 |
| ·GPV 对雏鹅肠道 NF-κB 基因 mRNA 表达影响的检测结果 | 第29-30页 |
| ·GPV 对雏鹅肠道 COX-2 和 iNOS 基因 mRNA 表达检测结果 | 第30-31页 |
| ·目的基因重组质粒 PCR 电泳结果 | 第31页 |
| ·重组穿梭载体鉴定 | 第31-32页 |
| ·穿梭载体 PCR 鉴定 | 第31页 |
| ·穿梭载体测序结果鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组腺病毒质粒 pAD-VP3 鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组腺病毒质粒的 PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·重组腺病毒质粒酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组腺病毒转染结果 | 第33-34页 |
| ·重组腺病毒 rAD-VP3 检测 | 第34-35页 |
| ·PCR 检测重组腺病毒 rAD-VP3 | 第34页 |
| ·重组腺病毒滴度测定 | 第34页 |
| ·Western-blot 检测结果 | 第34-35页 |
| ·动物免疫结果 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-43页 |
| ·小鹅瘟病毒感染临床表现和剖检变化 | 第37页 |
| ·小鹅瘟病毒感染对雏鹅肠道组织炎症因子的影响 | 第37-41页 |
| ·小鹅瘟病毒感染对雏鹅肠道 TNF-α的影响 | 第37-38页 |
| ·小鹅瘟病毒感染对雏鹅肠道 IL-1β的影响 | 第38页 |
| ·小鹅瘟病毒感染对雏鹅肠道 COX-2 的影响 | 第38-39页 |
| ·小鹅瘟病毒感染对雏鹅肠道 iNOS 的影响 | 第39页 |
| ·小鹅瘟病毒感染对雏鹅肠道 NF-κB 的影响 | 第39-41页 |
| ·小鹅瘟腺病毒载体疫苗构建 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 附图 | 第52-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
