| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1. 引言 | 第13-32页 |
| ·PRRSV的生物学特征 | 第14-15页 |
| ·PRRSV的分子生物学特征 | 第15-19页 |
| ·PRRSV的基因组结构及表达 | 第15-16页 |
| ·PRRSV的结构蛋白 | 第16-19页 |
| ·GP5 | 第16-17页 |
| ·M蛋白 | 第17-18页 |
| ·N蛋白 | 第18页 |
| ·其他次要结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·PRRSV免疫研究进展 | 第19-21页 |
| ·体液免疫反应 | 第19-20页 |
| ·细胞免疫反应 | 第20-21页 |
| ·PRRSV遗传变异 | 第21-23页 |
| ·结构蛋白编码区的变异 | 第22页 |
| ·非结构蛋白编码区的变异 | 第22-23页 |
| ·PRRSV的致病机制 | 第23页 |
| ·PRRSV的预防及控制 | 第23-24页 |
| ·PRRSV受体研究进展 | 第24-28页 |
| ·硫酸乙酰肝素 | 第24页 |
| ·唾液酸粘附素 | 第24-25页 |
| ·波形蛋白 | 第25-26页 |
| ·CD163 | 第26-27页 |
| ·非肌肉肌球蛋白Ⅱ型 | 第27-28页 |
| ·流式细胞术 | 第28-30页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第30页 |
| ·研究的目的及意义 | 第30-32页 |
| 2. 材料与方法 | 第32-51页 |
| ·材料 | 第32-36页 |
| ·细胞及病毒 | 第32页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第32页 |
| ·质粒及受体菌 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第34-36页 |
| ·试验方法 | 第36-51页 |
| ·GP5基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·设计引物 | 第36页 |
| ·Marc-145细胞的传代及收集 | 第36页 |
| ·病毒的扩繁 | 第36-37页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第37页 |
| ·GP5基因的RT-PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·GP5基因片段PCR产物的纯化回收 | 第38页 |
| ·目的基因的连接、转化及鉴定 | 第38-41页 |
| ·目的基因与pMD18-T载体的连接体系 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5 α)的制备 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化 | 第40页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·阳性克隆序列测序 | 第41页 |
| ·构建pEGFP-N_1-GP5载体 | 第41-43页 |
| ·酶切pMD-GP5和pEGFP-N_1空载体 | 第41-42页 |
| ·连接 | 第42页 |
| ·连接产物转化 | 第42-43页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第43页 |
| ·阳性克隆序列测序 | 第43页 |
| ·PCR扩增GP5+GFP融合基因 | 第43页 |
| ·构建pcDNA3.1-N_1-GP5+GFP载体 | 第43-45页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第43-44页 |
| ·融合基因GP5+GFP与pcDNA3.1-N_1载体的连接 | 第44页 |
| ·连接产物转化 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第45页 |
| ·阳性克隆序列测序 | 第45页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-N_1-GP5+GFP的提取 | 第45页 |
| ·293T细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·真核表达载体的转染 | 第46页 |
| ·倒置荧光显微镜检测重组GP5+GFP蛋白的瞬时表达 | 第46页 |
| ·镍柱纯化融合蛋白 | 第46-47页 |
| ·表达的重组GP5+GFP蛋白的Western blot鉴定 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白的除盐、浓度测定 | 第48-49页 |
| ·流式细胞术检测阳性细胞率 | 第49-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-59页 |
| ·反转录获得GP5基因 | 第51页 |
| ·pMD-GP5质粒的双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·pEGFP-N_1-GP5载体的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·PCR扩增GP5和GFP融合基因 | 第53-54页 |
| ·pcDNA3.1-N_1-GP5+GFP载体的双酶切鉴定 | 第54页 |
| ·转染HEK-293T细胞,荧光照片 | 第54-55页 |
| ·Western-Blot检测GP5+GFP融合蛋白 | 第55页 |
| ·考马斯亮蓝法测定重组蛋白的浓度 | 第55-56页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| ·蛋白质待测样品液测定结果 | 第56页 |
| ·流式细胞术检测不同细胞表面是否存在GP5受体 | 第56-59页 |
| 4. 讨论 | 第59-61页 |
| 5. 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 研究生期间发表论文 | 第70页 |
