一株鸡源性肠炎沙门氏菌MLST分型及三型分泌系统基因分析
| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-30页 |
| ·肠炎沙门氏菌流行情况 | 第14页 |
| ·肠炎沙门研究概况 | 第14-16页 |
| ·肠炎沙门氏菌细菌培养特性 | 第14-15页 |
| ·肠炎沙门氏菌生化特性 | 第15页 |
| ·肠炎沙门氏菌致病性 | 第15-16页 |
| ·肠炎沙门氏菌的侵袭性 | 第15-16页 |
| ·非侵袭性沙门氏菌的摄入 | 第16页 |
| ·沙门氏菌感染途径和机制 | 第16页 |
| ·沙门氏菌对宿主的致病性 | 第16页 |
| ·肠炎沙门氏菌检测方法 | 第16-19页 |
| ·常规的标准检测方法 | 第17页 |
| ·4-甲基伞形酮辛酯(MUCAP)试剂检测方法 | 第17页 |
| ·免疫荧光标记 | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA)] | 第17-18页 |
| ·核酸杂交技术 | 第18页 |
| ·PCR技术在沙门氏菌诊断中的应用 | 第18-19页 |
| ·多位点序列分型技术简介 | 第19-22页 |
| ·多位点序列分型的原理 | 第20-21页 |
| ·MLST的应用 | 第21-22页 |
| ·沙门氏菌耐药性 | 第22-26页 |
| ·沙门氏菌耐药性检测方法 | 第22-23页 |
| ·纸片扩散法 | 第22页 |
| ·稀释法 | 第22页 |
| ·自动化药敏仪法 | 第22页 |
| ·Etest法 | 第22-23页 |
| ·沙门氏菌耐药机制研究进展 | 第23-26页 |
| ·质粒介导的耐药性 | 第23-24页 |
| ·药物外排作用引起的沙门氏菌耐药 | 第24页 |
| ·膜通透性引起的耐药性 | 第24-25页 |
| ·药物作用靶位的改变 | 第25-26页 |
| ·钝化酶和灭活酶引起的耐药性 | 第26页 |
| ·肠炎沙门氏菌毒力岛 | 第26-30页 |
| ·毒力岛1的组成 | 第27-29页 |
| ·三型分泌系统的功能 | 第27-28页 |
| ·sipa基因功能 | 第28页 |
| ·sipb基因功能 | 第28-29页 |
| ·sipc基因功能 | 第29页 |
| ·sipd基因功能 | 第29页 |
| ·毒力岛2 | 第29-30页 |
| 2 材料及方法 | 第30-51页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·试验材料 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-51页 |
| ·分离菌常规鉴定 | 第30-31页 |
| ·细菌分离增殖 | 第30页 |
| ·分离菌培养特性及形态学观察 | 第30页 |
| ·生化反应及血清学鉴定 | 第30-31页 |
| ·分离菌16s rRNA鉴定 | 第31-34页 |
| ·16s rRNA通用引物设计 | 第31页 |
| ·细菌DNA提取 | 第31-32页 |
| ·PCR条件 | 第32页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第32-33页 |
| ·PCR产物连接 | 第33页 |
| ·连接产物转化 | 第33页 |
| ·质粒DNA提取 | 第33-34页 |
| ·阳性质粒酶切鉴定 | 第34页 |
| ·分离菌致病性试验 | 第34-35页 |
| ·SPF鸡接种试验 | 第34页 |
| ·商品蛋雏鸡接种分离菌 | 第34-35页 |
| ·小鼠攻毒 | 第35页 |
| ·肠炎沙门氏菌多位点序列分型 | 第35-41页 |
| ·扩增引物设计 | 第35-36页 |
| ·PCR反应条件 | 第36-37页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第37-38页 |
| ·PCR产物连接 | 第38页 |
| ·连接产物转化 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA提取 | 第39页 |
| ·阳性质粒PCR鉴定 | 第39-41页 |
| ·阳性克隆测序 | 第41页 |
| ·测序结果比对 | 第41页 |
| ·肠炎沙门氏菌ST11流行病学调查 | 第41-42页 |
| ·肠炎沙门氏菌凝集抗原的制备 | 第41页 |
| ·凝集试验 | 第41-42页 |
| ·交叉试验 | 第42页 |
| ·血清流行病学调查 | 第42页 |
| ·肠炎沙门氏菌药物敏感性试验 | 第42页 |
| ·细菌耐药基因扩增 | 第42-44页 |
| ·耐药基因引物设计 | 第42-43页 |
| ·PCR反应条件 | 第43-44页 |
| ·肠炎沙门氏菌sip a基因的测序 | 第44-47页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·PCR条件 | 第44-45页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第45-46页 |
| ·PCR产物连接 | 第46页 |
| ·连接产物转化 | 第46页 |
| ·质粒DNA提取 | 第46-47页 |
| ·阳性质粒酶切鉴定 | 第47页 |
| ·目的基因测序 | 第47页 |
| ·sipd基因测序 | 第47-51页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·PCR条件 | 第47-48页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第48页 |
| ·PCR产物连接 | 第48页 |
| ·连接产物转化 | 第48-49页 |
| ·质粒DNA提取 | 第49页 |
| ·阳性质粒酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·目的基因测序 | 第50-51页 |
| 3 试验结果 | 第51-63页 |
| ·细菌鉴定试验结果 | 第51-53页 |
| ·分离株培养特性 | 第51页 |
| ·分离菌生化特性 | 第51-52页 |
| ·分离菌血清学试验结果 | 第52页 |
| ·16sRNA扩增结果 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第53页 |
| ·测序结果 | 第53页 |
| ·致病性试验结果 | 第53-54页 |
| ·看家基因PCR结果 | 第54-55页 |
| ·看家基因扩增结果 | 第54页 |
| ·看家基因PCR鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·7个看家基因进化树 | 第55-56页 |
| ·肠炎沙门氏菌MLST分型结果 | 第56-57页 |
| ·肠炎沙门氏菌流行病学调查 | 第57-58页 |
| ·凝集试验结果 | 第57页 |
| ·交叉试验结果 | 第57页 |
| ·流行病学调查结果 | 第57-58页 |
| ·肠炎沙门氏菌耐药试验结果 | 第58-59页 |
| ·药敏试验结果 | 第58-59页 |
| ·耐药基因扩增结果 | 第59页 |
| ·肠炎沙门氏菌三型分泌系统测序分析 | 第59-63页 |
| ·sipA PCR胶回收结果 | 第59-60页 |
| ·sipA基因酶切鉴定 | 第60页 |
| ·SipD扩增结果 | 第60-61页 |
| ·Sipd酶切鉴定结果 | 第61页 |
| ·sipa基因测序结果 | 第61页 |
| ·sipa基因系统进化树分析 | 第61-62页 |
| ·sipD基因测序结果 | 第62页 |
| ·sipD基因进化分析 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·分离菌鉴定 | 第63页 |
| ·致病性试验 | 第63页 |
| ·细菌多位点序列分型及流行病学调查试验 | 第63-64页 |
| ·肠炎沙门氏菌耐药性分析 | 第64页 |
| ·肠炎沙门氏菌三型分泌系统分析 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 研究生期间发表论文 | 第76页 |
